蒋 燕 陆继好

    1.无锡卫生高等职业技术学校，江苏无锡 214111；2.无锡信孚医药技术有限公司，江苏无锡 214028

    复方α-酮酸是2000年和2004年国家医保目录品种以及国家基本药物(2004年)，临床应用于慢性肾衰患者的营养，延缓肾衰进展，纠正代谢紊乱，复方α-酮酸的口号是：拨慢肾衰进展的时钟。它由4种酮酸、1种羟酸和5种必需氨基酸配方制成，其中酮酸和羟酸以钙盐形式存在。酮酸或羟酸经过酶的转氨基作用合成相应的必需氨基酸，同时尿素氮被降减，通过再利用含氮代谢产物减少尿毒症毒素的蓄积，改善尿毒症症状；通过肾小球的高滤过，降低血磷和PTH水平延缓慢性肾衰的进程，从而推迟开始透析的时间；补充必需氨基酸则纠正基酸代谢紊乱，改善营养状况[1]。复方α-酮酸片中5种氨基酸除色氨酸外其他均无紫外吸收的特征，文献资料大多采用柱前衍生法，以邻苯二甲醛(OPA)和2-巯基乙醇为衍生化试剂，室温碱性条件下(PH约9.5)迅速产生本品的一级氨基酸反应，生成具有强荧光的产物1-硫代-2-烷基-异吲哚(紫外波长 335 nm，荧光波长 λEx=340 nm，λEm=450 nm)[2-10]。文献方法有5种氨基酸一次性测定方法，由于5种氨基酸的极性相差较大，此方法无法兼顾所有峰的峰形，易产生较大的测量误差，参照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版二部附录ⅤD)，选用最常用的紫外检测器测定含量，建立4种氨基酸的HPLC测定方法，经方法学研究，该方法准确方便，适合复方α-酮酸片中氨基酸的质量控制。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    高效液相色谱仪 (日本岛津公司)：SPD-10AVP紫外检测器；LC 10ATVP梯度泵，AT-130柱温箱。

    1.2 样品

    复方-α 酮酸片(开同片)，批号：20060701、20060702、200 60703，江苏信孚药业有限公司；对照品：苏氨酸(Thr)、组氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、醋酸赖氨酸(Lys-HAc)的含量均不少于99.0%。

    1.3 试剂

    乙腈为色谱纯；无水醋酸钠、冰醋酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠、碳酸氢钠、邻苯二甲醛(OPA)和2-巯基乙醇为分析纯；水为重蒸馏水。

    2 方法与结果

    2.1 衍生化试剂的制备

    精密称取邻苯二甲醛(OPA)0.025 g，用甲醇1 mL溶解，加 2-巯基乙醇 100μL，0.4 mol/L硼酸溶液(PH 9.5 ......