刘文伟 张雪燕 习 静 韩跃武

    兰州大学基础医学院生化教研所，甘肃兰州 730000

    诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器的研究

    刘文伟 张雪燕 习 静 韩跃武

    兰州大学基础医学院生化教研所，甘肃兰州 730000

    目的 建立一种检测慢性粒细胞白血病的方法。 方法 此实验在已经筛选出慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞5个特异性、结合率较高的核酸适体的基础上，构建了一种检测方法：采用两种纳米金属材料分别标记5个适体，将标记后的10个适体，两两组合与CML K562同时结合，一个作为捕获分子，一个作为测定分子与CML K562结合后，经氧化还原反应将测定分子上的金属转化成离子状态，利用电化学工作站检测对应的电流。 结果 筛选出了最佳组合(P2-S3-P1-S5)实现对CML K562的检测，得到了检测细胞数目与DPV电流值的拟合曲线方程。 结论 得到一种检测下限可达到50个细胞的诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器。

    核酸适体；纳米材料；CML K562；电化学生物传感器

    目前以适体作为识别元件的生物传感器有光学适体生物传感器、电化学生物传感器、压电石英晶体生物传感器[1-4]。SELEX技术自问世已有20多年的发展历程，光学适体生物传感器和压电石英晶体生物传感器已相继有商品，但适体电化学传感器的研究还处于起步阶段，其中早期诊断慢性粒细胞白血病(CML)的电化学生物传感器也是一个空缺。笔者采用两种纳米材料分别标记5个适体，两两组合，一个作为捕获分子，一个作为测定分子与CML K562结合后，经氧化还原反应将测定分子上的金属转化成离子状态，利用电化学工作站检测电流[5-10]，筛选出最佳组合，结合适体与CML K562的结合率，可以判断结合的CML K562的数量，得到一种操作简单、灵敏度高、快速的早期诊断慢性粒细胞白血病的方法。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂

    CHI1210A电化学分析仪(CHI公司，美国)、原子吸收分光光度计、德国耶拿原子吸收光谱仪，型号ZEEnit700。

    质粒抽提、PCR等试剂盒、100 bp DNA marker、胎牛血清(上海生工生物技术有限公司)生物素-链霉亲合素磁珠及磁力架、8种引物(上海生工生物技术有限公司)分别为P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8：带羧基磁性纳米颗粒(平均粒径为30 nm)(巴溪仪器有限公司)；四氯金酸溶液(HAuCl4，上海中秦化学试剂有限公司)等。

    1.2 方法 ......