复方松及片提取物对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响
羟脯氨酸,1材料与方法,1实验动物,药品,试剂和仪器,2模型建立与实验分组,3肺组织病理学观察,4肺组织中羟脯氨酸含量测定,5BALF中转化生长因子-β1(TGF-β1)的ELISA测定,6Realtime-
危金松 李金优 梅汝焕 曾豆豆 李子刚 陈季强 汤慧芳1.湖北省京山县中医院,湖北 京山 431800;2.浙江大学医学院 浙江省呼吸药物研究实验室,浙江 杭州 310058;3.浙江大学医学院附属妇产科医院,浙江 杭州 310000
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种原因不明、与年龄相关的破坏性肺部疾病,以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱导致肺间质纤维化为特征,通常这种实质病变具有不可逆性及严重的致死率[1]。目前尚无有效的治疗手段来阻止或逆转纤维化的过程,因此寻找可以在上皮损伤过度修复过程中发挥作用的药物,成为探索终止和逆转肺纤维化过程的关键。
复方松芨片(Compound Formula Rosin and Bletilla Table,CFRB)的主要成分是白及(Bletillae Rhizoma)、沙参(Fourleaf Ladybell Root,Radix Adenophorae)、百部(Stemona Root,Radix Stemonae)等,这些成分均归肺经,具清肺、化痰、止咳、扶正抗痨、止血生肌等功能,临床上主要用于各型结核病出血、慢性咳喘及慢性胃肠疾病等,临床效果显著。有文献报道白及对矽肺肺部症状有改善作用[2],而沙参对博莱霉素诱导的肺纤维化有改善作用[3-5],但作用尚不清楚。本研究采用博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型,研究CFRB对肺纤维化病理改变的影响,进一步检测代表性的炎症因子如TGF-β1的分泌,肺组织中羟脯氨酸的含量等,并从mRNA表达水平进行了相关机制研究,为临床治疗肺纤维化提供新途径,为老药新用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物、药品、试剂和仪器
ICR小鼠,雄性,8周,体重在20~22 g,由浙江大学动物实验中心提供,动物合格证号:2007000526749。动物饲养及操作过程均遵守浙江大学《实验动物管理条例》要求。
博莱霉素(Sigma 公司,批号:9041-93-4),复方松及片(京山中医院,批号:20100501),地塞米松磷酸钠注射液(浙江省仙琚制药股份公司)。
Real time PCR 相关试剂[包括 dNTP Mixture,Oligo(dt)18 primer,RNase Inhibitor,M-MLV Reverse Transcriptase,宝生物工程(大连)有限公司],羟脯氨酸测定试剂盒(凯基,KGT030-2),小鼠TGF-β1 ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司) ......
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