张洪菊 李庆华 王立洪 蔺亚妮 常国强 庞天翔

    中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室，天津 300020

    钙调磷酸酶B同源蛋白 (calcineurin B homologous protein，CHP)是具有多个 EF-hand 结构的钙离子(Ca2+)结合蛋白。目前报道该家族拥有3个成员，分别被命名为CHP1、CHP2、CHP3[1]。其中CHP1 广泛表达于各种组织，CHP3 特异性表达在一些正常组织，而CHP2 与这两个成员不同，它主要表达在一些肿瘤组织中[2]。最初因发现其在肝癌组织中高表达而命名为肝细胞癌抗原520(hepatocellular carcinoma antigen520，HCA520)[3]，因此被认为是一种肿瘤相关抗原。CHP2 已被证明在肿瘤细胞的增殖、转移等方面具有重要作用[4]，目前的研究表明CHP2 主要是通过调节钠氢离子交换蛋白 1(Na+/H+exchanger 1，NHE1)活性而发挥功能，通过与NHE1 结合而激活NHE1，发挥其调控细胞内离子转运及细胞酸碱的功能[5-6]。但是，CHP2 作为一个Ca2+结合蛋白，EF-hand是其分子中结合Ca2+的关键序列，对CHP2 发挥正常功能具有重要作用，目前国内尚缺乏EF-hand对CHP2 细胞内定位、功能以及与NHE1的相互作用中的影响的报道，本研究将对这些内容进行探讨。

    1 材料与方法

    1.1 实验试剂及材料

    45CaCl2购自美国Dupont-NEN公司。NHE表达缺陷的PS120 细胞系、CHP2 和NHE1的兔抗人多克隆抗体及野生型人NHE1的真核细胞表达质粒pECE均由日本国立循环系统疾病中心研究所馈赠。E.Coli(BL21-star)、LipofectamineTM2000 Reagent kit购自美国Invitrogen公司。DMEM培养基、胎牛血清购自美国GIBCO公司。本实验中所用到的其他质粒均为本实验室保存。

    1.2 细胞培养

    PS120 及相应的转染子按常规方法在(含25mmol/L NaHCO3、体积分数为10%的小牛血清、50 U/mL青霉素和50 μg/mL链霉素)DMEM培养基中培养于37℃，含5%CO2，饱和湿度的培养箱中。

    1.3 CHP2 cDNA的克隆及其表达载体的构建

    提取人类血液细胞的总RNA，逆转录成cDNA，采用PCR扩增CHP2的全长cDNA序列 ......