补肾益气活血中药对大鼠缺血再灌注脑组织血管内皮生长因子表达和血脑屏障通透性的影响
生理盐水,阳性细胞,1仪器与试药,1试验动物,2试药,3仪器,4试验动物分组及模型制备,5行为学检查,6血脑屏障通透性的定量测定9-10,7VEGF表达检测,8脑组织病理学检查
赵凤玲 孙佳红 张宝兰 张秀梅内蒙古医学院第四附属医院,内蒙古包头 014030
寻求脑梗死的治疗方法一直是世界医学的焦点。血管内皮生长因子(VEGF)是一类普遍存在于中枢神经系统的生长因子,又称为血管通透性因子,具有刺激血管内皮细胞增生、迁移,促进血管生成和增加血管通透性的作用[1]。VEGF直接作用于血管内皮细胞的有丝分裂原及内皮细胞上的受体,发挥其促血管再生的作用[2]。目前认为VEGF是最重要的成血管因子[3]。研究表明,VEGF是强效血管再生因子,VEGF可使血脑屏障(BBB)内皮细胞间紧密联接蛋白复合物的完整性破坏,从而引起BBB通透性增高,诱发脑水肿[4]。VEGF是主要的血管生成的调节介质和一个强血管通透性因子。VEGF能够开放BBB和介导脑水肿[5]。Davisa等[6]发现在VEGF表达后BBB有着明显的开放,并得出了VEGF是通过提高表达VEGFR-2而实现开放血脑屏障的结论。本实验研究旨在深入探讨脑缺血再灌注后VEGF表达的动态变化与BBB破坏的关系,为VEGF临床应用前景提供实验依据。
1 仪器与试药
1.1 试验动物
健康雄性Wistar大鼠80只,体重350~420 g,包头医学院实验动物部提供(符合国家清洁级动物标准)。
1.2 试药
血塞通注射液(昆明制药集团股份有限公司,批号:12FB17),脉络宁注射液(金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂,批号:20111023),10%水合氯醛,生理盐水,4%多聚甲醛(PBS,0.1 mol,pH 7.4),甲酰胺,伊文思蓝(Evans blue,EB),试剂盒(武汉博士德公司提供)。
1.3 仪器
荧光分光光度仪(960型,上海光学仪三厂),单尼龙线,水浴箱,石蜡切片机,光学显微镜。
1.4 试验动物分组及模型制备
大鼠随机分为假手术组8只,生理盐水对照组36只(分别为缺血90 min再灌注1,3,7 d各12只)和中药组36只(分组同生理盐水对照组)。每小组中6只用于BBB通透性的测定,6只用于VEGF的检测。大脑中动脉闭塞再灌注模型制作参照koizumis线栓法[7]。10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉后,颈部切口,分离左侧的颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉及其分支,结扎颈外动脉及其分支,在颈内动脉近端放线,远端放动脉夹,颈总动脉分叉处剪一小口,将直径0.25 mm单尼龙线经小口插入颈内动脉(18±1)mm ......
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