李永伟 杨跃武 陆慧琼

    中山大学附属第三医院中医科，广东广州 510630

    痰热清注射液属国家新药中药二类，方中以黄芩为君药，熊胆粉、山羊角为臣药，金银花为佐药，连翘为使药[1]，具有清热、解毒、化痰等功效，主治急性支气管炎、急性肺炎(早期)出现的痰热阻肺症状，但其主要药物如黄芩、熊胆粉、山羊角俱为归于肝胆经的药物，其中，绿原酸对肝癌还具有显著的抑制作用[2]，但未见痰热清复方注射液用于治疗肝癌的相关文献报道。中山大学附属第三医院临床采用痰热清注射液治疗中医证型辨证为肝胆湿热的肝炎、肝硬化和肝癌在内的多种肝脏疾病，结果显示可减少肝癌介入栓塞术后综合征，如发热、腹痛、呕吐等症状[3]。本研究初步观察了痰热清注射液对肝癌细胞株HepG2生长及细胞周期的影响，现报道如下：

    1 材料与方法

    1.1 材料

    DMEM 培养基(GIBCO 公司)，MTT(Sigma公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，96孔、6孔培养板及25 cm2培养瓶(COSTER 公司)，酶标仪(BIO-RAD、Model450 MICRoPLATE READER)，痰热清注射液由上海凯宝药业有限公司生产，批准文号：国药准字Z20030054。

    1.2 细胞抑制率检测

    采用MTT法。

    1.2.1 细胞培养及药物浓度设定 收集复苏后培养传代5代以内对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板中每孔加入200 μL铺板，使待测细胞密度调至5000个/孔。细胞生长48 h后，根据多次预实验结果，将痰热清注射液按原药物浓度用DMEM倍比稀释成8个浓度梯度：40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125 mg/L，并设空白对照组，每组设4个复孔，实验重复3次。

    1.2.2 细胞抑制率测定 加入药物后培养48 h，先弃去培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗 3遍后 ......