犀角地黄汤对胶原诱导性关节炎大鼠模型滑膜组织中磷脂酶C-γ1表达的影响
1材料与仪器,1实验动物,2药品与试剂,3仪器,2方法,1大鼠分组及CIA模型构建,2动物模型的给药,3模型及治疗评价,4标本制备,5实时荧光定量PCR,6统计学方法,3结果,1模型及治疗
李 茜 高 峰 杨学文1.南京中医药大学针药结合重点实验室,江苏南京 210046;2.南京中医药大学附属医院检验科,江苏南京 210029
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)急性期发病迅速,病程持续,关节僵硬肿痛,甚至生活不能自理,给患者造成极大的痛苦。目前临床治疗方案多以大量使用激素及免疫抑制剂为主,这种方案主要有两大问题:一是具有不可忽视的副作用;二是对一些不适宜使用激素或免疫抑制剂的患者无从下手。因而近年来中医药治疗RA的作用越来越引起关注,从瘀热的病理角度治疗类风湿关节炎得到普遍认同[1]。本研究测定大鼠关节滑膜组织中磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在大鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型形成以及应用犀角地黄汤治疗过程中的表达水平,目的在于进一步探讨犀角地黄汤治疗RA急性期的作用机制。
1 材料与仪器
1.1 实验动物
6~8 周龄雄性 SD 大鼠 45 只,体重(150±10)g,购于上海斯莱克实验动物中心。
1.2 药品与试剂
犀角地黄汤(犀角、生地黄、芍药、丹皮、虎杖、地龙)由南京中医药大学附属医院药剂科配制。鸡Ⅱ型胶原蛋白、完全福氏佐剂购自美国Sigma公司;Trizol购自Invitrogen公司;反转录试剂盒、DNA marker、Taq DNA聚合酶试剂盒购自大连TaKaRa公司;引物、探针委托Invitrogen公司合成:根据文献[2]合成PLC-γ1(Forwards:5'-GTCGACCTCATCAGCTACTA-3';Reverses:5'-GGCTGTTCTCATCCAGATGC-3') ,采用看家基因磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)(Forwards:5'-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3';Reverses:5'-AGATCCACAACGGATACATT-3)作为内对照。
1.3 仪器
Eppen-dorf Centrifuge 5417R高速冷冻离心机、Biophotome-ter紫外可见分光光度计为德国Eppendorf公司产品;ABI7500实时荧光PCR仪为美国ABI公司产品;凝胶成像系统为日本Kodak公司产品。
2 方法
2.1 大鼠分组及CIA模型构建
2.1.1 分组 将6~8周龄雄性SD大鼠45只 ......
您现在查看是摘要页,全文长 9611 字符。