温石棉及其代用纤维对鼠细胞EGFR及Survivin表达的影响
悬液,粉体,1材料与方法,2方法,3统计学方法,2结果,3讨论
邓丽娟 王洪州▲ 王利民 董发勤1.四川绵阳四〇四医院 川北医学院附属第二医院呼吸内科,四川绵阳 621000;2.西南科技大学校长办公室,四川绵阳 621000
国际上对温石棉的生物安全性存在较大争议[1-2],一些学者认为温石棉的毒性和温石棉所带金属离子、表面电荷、产地等性质有较大关系。另一些学者认为温石棉的代用纤维也能够引起慢性肺炎,并且发现岩棉纤维可引起基因突变。也有学者认为温石棉与烟溶液联合对人胚肺细胞DNA的损伤具有协同作用[3-6]。由此可见温石棉的代用纤维对人体可能也不安全。本研究利用免疫组化的方法检测肿瘤基因表达,一方面拟证实其毒性,另一方面探讨其致癌的部分机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞来源
中国仓鼠肺细胞 (Chinese hamster lung cell,V79细胞)购买自四川大学华西医学中心生物医学实验室。
1.1.2 材料与试剂
温石棉、四川新康温石棉、陕西陕南温石棉、玻璃纤维、陶瓷纤维、硅灰石、岩棉来自四川西南科技大学实验室。兔抗鼠EGFR、Survivin单克隆抗体购于武汉博士德公司。免疫组化SABC试剂盒(SA1022)购于武汉博士德公司。
1.2 方法
1.2.1 制备实验组粉体及其悬液
将各实验原矿处理成5 μm左右长,具体方法:将实验原矿反复碾压、劈分、剪短后,然后再进行细研磨,之后进行筛选过滤;然后烘干,最后研磨成更细的粉体。电镜图片见图1。用高温杀菌消毒各种实验粉体,配置成 6 个不同浓度:1、2、4、6、8、10 mg/L。
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图1 温石棉及其代用品粉体的扫描电镜图
1.2.2 免疫组织化学检测肿瘤基因EGFR及Survivin的表达
1.2.2.1 实验分组 实验共分为7组,实验组包括四川新康温石棉组(A组)、陕西陕南温石棉组(B组)、玻璃纤维组(C组)、陶瓷纤维组(D组)、硅灰石组(E组)、岩棉组(F组),并设阴性对照组(G 组) ......
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