彭美莲

    浙江省立同德医院妇产科，浙江杭州 310012

    随着经济的发展，近年来不孕不育症的发生率逐年增高，卵母细胞体外成熟(IVM)是一项新的辅助生殖技术[1]，是指应用少量促性腺激素或者不经过促排卵而直接从卵巢中获取体内未成熟的卵子，经过适当条件的体外培养，促使卵子成熟并具备受精能力，可以因减少刺激或无刺激而降低常规体外受精(IVF)中促排卵过程的高额费用，降低常规促排卵药物引起的卵巢过度刺激综合征等不良反应的发生率[2-3]。1991年人未成熟卵母细胞IVM技术获得首次成功[4]，此后其发展一直较为缓慢，而卵母细胞IVM技术的一项重要内容即为IVM培养液，IVM培养液是IVM技术发展的首要前提。目前临床使用的培养液大多为在常规基础培养液上加入血清等成分，目前还没有一种价廉、现成、稳定和安全的商品化的IVM培养液。本研究中将小鼠各个时期卵母细胞置入不同配方卵母细胞IVM培养液中培养并进行IVF，比较所获得的卵母成熟率、卵裂率、IVF受精率，研制一种相对稳定的改良培养液，通过对IVM培养液成分的干预，改善卵母细胞IVM的条件，为探索辅助生殖新途径及临床应用提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    昆明小鼠50只，普通级，均为健康雌鼠未孕，6～10周龄，体重20 g左右，由中国科学院遗传与发育生物学研究所实验动物中心提供，所有小鼠适应性饲养1周，给予光照14 h，暗适应10 h，自由摄食摄水。根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组，每组各25只。

    1.2 IVM培养液的配制

    A组：低糖培养基(DMEM)，由美国Gibco公司生产；孕马血清促性腺激素(PMSG)，由宁波第二激素厂生产；人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)由珠海丽珠生物工程有限公司生产，加入基础培养液中进行培养。B组：采用含15%～20%胎牛血清的人类输卵管液 (HTF)加入基础培养液中进行培养(国产杭州四季青)[4]。

    1.3 卵母细胞的收集

    所有小鼠首先给予10 U PMSG(宁波激素制品厂)腹腔注射，46～48 h后收集卵母细胞。将小鼠断颈处死后取出卵巢，置于M2操作液冲洗过滤除去脂滴，在显微镜下用刺卵针收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)，得到小鼠GⅤ期、MⅡ期卵母细胞[5-6]，移入IM液中进行漂洗，再将A、B组移入IVM培养基中培养。

    1.4 卵母细胞的体外培养

    在37℃、5%CO2条件下培养[7]，卵母细胞成熟的标志：拆除颗粒细胞后以排出第一极体即为卵母细胞成熟的标志[8] ......