杜彬荣 章宝娟▲ 胡 斌

    1.浙江省绍兴市绍兴第二医院，浙江绍兴 312000；2.浙江省绍兴市药检所中药室，浙江绍兴 312071

    聚酰胺胺(PAMAM)树状大分子是由Tomalia 等[1]首次合成的一类新型的聚合物，具有较大的内部空腔和大量的端基官能团，可与多种有机小分子或聚合物结合，并且具有细胞毒性低等许多独特的生物性状。正是由于这些优势使其非常适宜作为药物和基因的转运载体[2-4]。众所周知，多数药物进入人体后，必须通过血浆的储存和运输才能到达靶部位，进而发生药理作用。 血清白蛋白是血液中一类重要的蛋白质，对许多内源性和外源性的药物都具有较高的亲和力[5]。 血清白蛋白还可与许多金属离子结合，另有报道显示，具有不同末端基团的PAMAM 也可与多种金属离子(Cu、Zn、Co、Ni、Pb、Cd)发生配位作用[6-7]。 因 此，研究PAMAM，金属离子与白蛋白的相互作用，对阐明该药物载体在体内的转运、分布和代谢等具有重要意义。

    本实验利用紫外-可见光谱法研究Co2+与PAMAM树状大分子的配位作用；利用荧光光谱法研究PAMAM树状大分子在生理条件下与牛血清白蛋白、Co2+三者的作用，并探讨相互作用机制，以及对蛋白构象的影响。

    1 仪器与试药

    1.1 试剂

    3.5 代(G3.5，具有末端酯基)和4.0 代(G4.0，具有末端氨基)以乙二胺为核的PAMAM 树枝状大分子，实验室自制；牛血清白蛋白BSA(组分Ⅴ，生化试剂，南京大冶生物科技有限公司)；CoCl2(分析纯，上海振兴试剂厂)；三羟甲基氨基甲烷；实验用水为二次蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

    1.2 仪器

    RF5301 型荧光分光光度计(日本岛津公司)；UV2100 型紫外分光光度计(日本岛津公司)；pHS-25型酸度计(上海伟业仪器厂)；BS 124S 型电子天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]。

    2 方法与结果

    2.1 紫外光谱法研究G4.0 PAMAM 和G3.5 PAMAM与Co2+配位作用

    配制一定浓度的G3.5 PAMAM 和G4.0 PAMAM树状大分子与Co2+的混合体系，在波长为200～800 nm的范围内扫描紫外光谱，狭缝宽度为2.0 nm[8]。

    2.2 各类PAMAM 树状大分子对牛血清白蛋白荧光的猝灭作用

    将BSA 溶解于pH 为7.4 的Tris-HCl 缓冲盐溶液(缓冲液含NaCl 的浓度为100 mmol/L)中 ......