张晓岚

    河北省眼科医院耳鼻喉科，河北邢台 054001

    喉鳞状细胞癌是头颈部肿瘤中常见的恶性肿瘤，恶性度高，易发生局部复发及远处转移，其发生、发展、预后及转移的研究已经成为了耳鼻咽喉-头颈外科的研究热点。细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1，CHK1)是在生物进化过程中极为保守的蛋白激酶，研究表明CHK1 在人类许多恶性肿瘤中均有表达，可能与肿瘤的发生、发展及预后有关[1]。 RAD51 基因是细胞DNA 修复系统中的重要组成部分，研究表明RAD51 在人类许多恶性肿瘤中也呈高表达[2]。 本研究应用免疫组织化学方法检测RAD51 及CHK1 在喉鳞状细胞癌组织、对应的癌旁正常黏膜组织及非喉部恶性肿瘤疾病患者的正常黏膜组织中的表达情况，并探讨二者间的关系，现报道如下：

    1 材料与方法

    1.1 材料来源

    收集2012 年1～12 月于河北省眼科医院(以下简称“我院”)手术治疗经病理确诊的喉鳞状细胞癌患者50 例， 切取其喉鳞状细胞癌组织及同一患者的癌旁正常黏膜组织50 例。 另收集同期我院手术治疗的非喉部恶性肿瘤疾病(如声带息肉等)患者的喉部正常黏膜组织17 例。 喉鳞状细胞癌患者中男47 例，女3 例；年龄46～79 岁，中位年龄59.5 岁；年龄≤59 岁12 例，年龄>59 岁38 例；癌肿直径≤2 cm 34 例，>2 cm 16 例；分型：声门上型17 例，声门型32 例，声门下型1 例；病理学分级：G1+G2级29 例，G3级21 例；临床分期：Ⅰ、Ⅱ期19 例，Ⅲ、Ⅳ期31 例；淋巴结转移者(N+)29 例，无淋巴结转移者(N0)21 例。 非喉部恶性肿瘤疾病患者中男12 例，女5 例；年龄42～76 岁，中位年龄56.2 岁。 喉鳞状细胞癌患者与非喉部恶性肿瘤疾病患者的年龄、性别比较，差异无统计学意义(P >0.05)，具有可比性。 本研究经医院伦理委员会通过，患者均知情同意并签署知情同意书。

    1.2 方法

    采用免疫组织化学二步法。 标本离体后1 h 内采集，置入速冻管，迅速保存于-80℃冰箱内。 将选取的50 例喉鳞状细胞癌组织、对应的50 例癌旁黏膜组织和17 例正常喉黏膜组织常规福尔马林固定、石蜡包埋、4 μm 切片。实验试剂包括CHK1 兔抗人多克隆抗体、RAD51 兔抗人多克隆抗体、兔二抗免疫组化试剂盒、鼠二抗免疫组化试剂盒、DAB 显色液。 用PBS 代替一抗孵育切片为空白对照。

    1.3 结果判定 ......