陈美霓 郭 巍 赵菊梅 魏晓丽 王爱红 庞秋霞

    1.延安大学医学院实验中心，陕西延安 716000；2.延安大学医学院附属医院泌尿外科，陕西延安 716000

    原发性肝细胞癌是全球第5 位常见恶性肿瘤，其 病死率占恶性肿瘤病死率的第3 位。 据2008 年的报道，中国肝癌5 年患病数为29.6 万例，约占全球肝癌5 年患病数的48.3%。 在未来10 年肝癌的发病数和病死数均将呈现上升趋势。 采用手术切除等治愈方法仅适合10%～20%的肝癌患者，在5 年内复发率仍超过70%[1]。 所以寻找以肿瘤细胞特性为作用靶点的分子靶向治疗有着特别重要的意义。 HSP90 抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对多种肿瘤细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，但目前尚未见17-AAG 对肝癌细胞生长及凋亡影响的报道，本文探讨17-AAG 对HepG2 细胞增殖、生长周期、诱导凋亡及对重组人血管内皮生长因子相关蛋白(VEGF-C)的表达进行初步探讨，为17-AAG 治疗肝癌的应用提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    人肝癌细胞株HepG2 由延安大学医学院实验中心提供。 RPMI-1640 培养基(赛默飞世尔公司)，17-AAG、四甲基偶氮唑蓝(MTT)及碘化丙啶(PI)(美国Sigma 公司)AnnexinV FITC 细胞凋亡检测试剂盒(美国BD pharmingen 公司)，RNase A 酶(德国Merck 公司)，胎牛血清(美国Hyclone 公司)，兔抗人VEGF-C蛋白、兔二抗及DAB 显色剂(武汉博士德公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 取液氮保存的人肝癌HepG2 细胞在37℃恒温水浴箱中快速复苏，接种于内含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养液中常规培养，选取对数生长期细胞用于实验研究。

    1.2.2 MTT 法检测细胞增殖能力 选取对数生长期的人肝癌HepG2 细胞用0.25%胰蛋白酶消化，加完全培养液制成单细胞悬液，以每孔为3×103个细胞接种于96 孔培养板中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。培养24 h 后弃上清液，设无细胞孔作为空白组，不加药孔为对照组，实验组17-AAG 浓度为0.63、1.25、2.5、5.0 μmol/L，每组设5 个平行孔。分别温育24、48、72 h后，每孔加入20 μL 浓度为5 mg/mL 的MTT 溶液，培养4 h，吸净上清液，每孔加入150 μL 二甲基亚砜(DMSO) ......