牟方祥 吴红 王恒 邹德生 王勇 方勇飞

    [摘要] 目的 建立检测红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamates，MTXPG)的酶联免疫吸附测定法(ELISA)方法。 方法 将含有MTXPG的红细胞采用冻融法、化学裂解法、酶法、超声破碎法等方法裂解，加入血清与裂解液在抗坏血酸、巯基乙醇保护液作用下将MTXPG转化为甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)，转化液采用高氯酸、三氯乙酸及饱和硫酸铵溶液沉淀蛋白，最后将溶液pH值调整为3.0～9.0，采用ELISA检测MTX浓度。经方法学考核后，检测临床标本对方法准确性进行评价。 结果 发现冻融法与冻融法裂解红细胞显著优于酶法和化学裂解法(P 0.05)，最适pH为6～8，最佳pH值为6.8。浓度在0.2～10.0 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9967)，回收率为96.6%～103.3%，RSD为8.0%～14.3%，日内差异为1.7%～11.7%，日间差异为7.4%～13.5%，RSD均小于15%。检测患者红细胞内MTXPG浓度为(64.75±28.45)ng/mL。 结论 建立的红细胞内MTXPG的ELISA法有良好的准确性和特异性，方法操作简单易行，可用于临床红细胞内MTXPG浓度的监测。

    [关键词] 多聚谷氨酸化甲氨蝶呤；甲氨蝶呤；固相酶联免疫吸附法；裂解

    [中图分类号] R593.22 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2015)01(c)-0091-04

    多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamates，MTXPG)是甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)在体内的代谢产物[1]，1973年Baugh等[2]首次报道在人红细胞内发现MTXPG，后在人肝脏细胞中也存在MTXPG[3]。MTX作为一种叶酸拮抗剂，广泛用于抗肿瘤、免疫抑制、抗风湿、异位妊娠等治疗[4-8]。MTXPG被认为是人体内MTX发挥药理作用的活性成分[3]，低剂量MTX常用于治疗类风湿关节炎 ......