聂玺 张洁 余超 谭敦勇

    吉首大学医学院生物化学与免疫学系，湖南吉首416000

    过表达D5 Stat5a促进前列腺癌细胞增殖及IGFBP-7基因启动子组蛋白甲基化

    聂玺 张洁 余超 谭敦勇

    吉首大学医学院生物化学与免疫学系，湖南吉首416000

    目的探讨D5 Stat5a对人类前列腺癌细胞增殖的影响及其对胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)表达的影响。方法常规培养人前列腺癌细胞(DU145及PC3)，并随机分为四组：对照组及三个实验组。对照组以不含外源基因的腺病毒感染，三个实验组细胞则以携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染，其病毒感染增殖活性(MOI)依次为10、20及30。四组细胞均在培养液中加入催乳素(50 ng/mL)以启动细胞信号转导。运用MTS方法检测细胞增殖；实时定量PCR检测抑癌基因IGFBP-7及EZH2 mRNA水平；染色质免疫共沉淀技术(ChIP)检测IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化程度；蛋白质印迹法检测IGFBP-7蛋白表达。结果携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒感染能够呈剂量依赖式地促进前列腺癌细胞(DU145及PC3)增殖。如PC3细胞，对照组细胞的相对活细胞数为(1.362±0.018)，三个实验组相对活细胞数分别为(1.453±0.022)(P>0.05)、(1.649±0.020)(P<0.05)及(1.829± 0.027)(P<0.05)。实时定量PCR及蛋白印迹证明D5 Stat5a过表达明显下调IGFBP-7的表达。DU145及PC3对照组细胞IGFBP-7 mRNA相对值分别为(0.796±0.023)及(0.871±0.046)，而感染携带D5 Stat5a cDNA的腺病毒(MOI 30)后，其IGFBP-7 mRNA相对值则分别下降到(0.148±0.019)(P<0.01)及(0.078±0.021)(P<0.01)。染色质免疫共沉淀分析(ChIP-Assay)证实，D5 Stat5a导致IGFBP-7基因启动子区域组蛋白甲基化(H3K27Me3)水平显著上升。DU145细胞对照组与实验组，其沉淀DNA比例分别为(0.0176±0.0030)%及(0.0650±0.0099)%，两者差异有高度统计学意义(P<0.01)。此外，实时定量PCR检测表明，D5 Stat5a引起组蛋白甲基转移酶EZH2 mRNA大幅上升。DU145细胞对照组及D5 Stat5a感染组相对mRNA水平分别为(0.0033±0.0004)及(0.0160±0.0035) ......