谢贵林 陈璐艳 陈新华 温 浩 陈新梅

    1.浙江省绍兴第二医院普外科，浙江绍兴 312000；2.浙江大学第一附属医院普外科，浙江杭州 310000；3.新疆医科大学第一附属医院普外科，新疆乌鲁木齐 830054；4.山东中医药大学药学院，山东济南 250355

    乳腺癌成为威胁女性的重大健康问题[1]。 根据我国2014 年肿瘤年报， 乳腺癌发病率和病死率持续增高[2]。MDA-MB-231 可以用于制作研究高侵袭乳癌细胞的细胞模型和动物模型[3]。目前多学科联合治疗是乳腺癌的主要方法[4]。根据目前消融介入技术的发展，微创消融也逐渐进入乳腺癌的综合治疗计划中。脉冲场强可以引起电穿孔[5]，电穿孔不仅提高细胞膜对化疗药物的渗透率，增强化疗药物细胞毒性，还能通过降低化疗药物的使用剂量从而减小对正常细胞的毒副作用。而纳秒脉冲是不同于电穿孔技术的最新一代电脉冲消融技术。 纳秒脉冲引起细胞膜的微孔出现，最终形成细胞凋亡[6-7]。避免了严重的炎性反应[8]，凋亡最初是在胚胎[9]及免疫系统[10]发育中发现。 而在肿瘤治疗中凋亡产生则意味着肿瘤被消灭而机体未被伤害。Caspase 是凋亡发生的一个重要分子标志[11-13]，在本实验中纳秒级脉单独治疗肿瘤，避免了化疗副作用。

    纳秒脉冲在美国已经开展皮肤基底细胞癌的临床前期试验，在政府网站上可见其登记号码Clinicaltrials.gov ID：NCT01463709)。 脉冲治疗仪器已经产业化，AngioDynamics 公司已将该治疗仪用于首例早期肝脏肿瘤的治疗中，它可以在诱导肿瘤细胞凋亡的同时抑制新生血管的形成，从而防止肿瘤的复发[14]。 纳秒脉冲的波长要远小于微妙脉冲，是一种非热生物效应及非药物依赖性治疗方法， 具有良好的应用前景。本实验旨在观察nsPEFs 对于乳腺癌细胞的消融效果，对乳腺癌细胞MDA-MB-231 的分子作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株及抗体

    人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 由浙江大学医学院附属第一医院多器官联合移植实验室提供，含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养基中37℃，5%CO2下培养，取对数生长期的细胞进行实验。

    1.2 nsPEFs 治疗

    纳秒脉冲发生器由杭州睿笛生物科技有限公司制造NANOABLATION 肿瘤消融仪器。 2.5×106个细胞放置于电极杯中治疗。治疗后的细胞置于培养箱中孵育1 h 后进行相关实验。

    1.3 CCK-8 法检测细胞活性 ......