孔庆暖 王丽娜 韩增磊 黄维清▲

    1.山东省青岛市市立医院病理科，山东青岛266071；2.山东省青岛市第六人民医院暨青岛市传染病医院检验科，山东青岛266000

    液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片方法学的建立及免疫组化染色应用

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    1.山东省青岛市市立医院病理科，山东青岛266071；2.山东省青岛市第六人民医院暨青岛市传染病医院检验科，山东青岛266000

    目的应用液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片，以期建立更加简单直观且能够与分子生物学相结合的外周血淋巴细胞形态学检查方法。方法利用Ficoll-hypaque密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞，液基细胞保存液中过夜保存，液基薄层涂片技术制作细胞涂片，并通过SP免疫组化染色观察T淋巴细胞及B淋巴细胞表面抗原CD3和CD20在涂片淋巴细胞中的表达，并通过表达部位获取两种抗原的免疫表型保存情况。结果对5名健康者外周静脉血制作淋巴细胞涂片，淋巴细胞获得率达95%以上，形态保存完好，SP免疫组化法显示，CD3和CD20抗原均清晰表达在相应淋巴细胞亚群的细胞膜上，通过免疫组化法计数的淋巴细胞亚群比例和文献结果相一致。结论与传统外周血手工涂片相比，液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片可快速有效地应用于外周血淋巴细胞形态学观察和免疫组化染色，对临床淋巴细胞亚群分类、淋巴瘤分型及预后判断有重要的应用价值。

    外周血；淋巴细胞；液基薄层制片；免疫组化

    目前外周血形态学检测主要是应用传统血涂片的方法，但是存在重复性差、涂片质量较低等缺点，且对淋巴系统相关病变引起的外周血淋巴细胞形态学改变不能细致观察，漏诊率高，无法应用于下一步的分子生物学检测[1]。液基细胞学，简称TCT(ThinPrep Cytology Test)，是一种将脱落细胞保存在液体中，并通过特殊设备将细胞均匀分散贴附在载玻片上制成涂片的技术，20世纪90年代中后期开发[2]，目前主要在病理科应用于宫颈细胞学及体腔脱落细胞学检测，它是通过机械、气动与流体力学原理，用全自动设备将细胞涂成均匀的薄层标本，其操作方法简单，细胞形态和细胞表面相关抗原保存良好，技术水平先进[3-4]。因此，本研究通过反复实验和条件调整，将液基薄层制片技术与外周血淋巴细胞提取相结合，跨学科建立了一种可清晰准确地观察外周血淋巴细胞形态的方法，经过验证该方法可应用于进一步SP免疫组化染色，该方法的建立将为恶性淋巴瘤的临床诊疗及判断预后带来新的思路，有非常广阔的应用前景。

    1 资料与方法 ......