李勇波 张孝斌 程 帆 饶 婷 余伟民武汉大学人民医院泌尿外科，湖北武汉 430060

    稳定过表达m icroRNA-96前列腺癌细胞株的建立及其对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响

    李勇波张孝斌程帆饶婷余伟民

    武汉大学人民医院泌尿外科，湖北武汉430060

    目的 构建稳定过表达microRNA-96(miR-96)的前列腺癌DU-145细胞株并研究其对DU-145细胞增殖和迁移的影响。方法 构建miR-96慢病毒表达载体并转染前列腺癌细胞DU-145，嘌呤霉素筛选出稳定表达miR-96(实验组)及阴性对照(对照组)的细胞株；通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染后两组细胞miR-96的表达；克隆形成实验和MTT实验检测两组的细胞增殖情况。transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力。结果经过筛选后各组转染细胞发光效率均>90%；qRT-PCR结果显示实验组miR-96表达水平明显高于对照组(P<0.05)；克隆形成实验显示实验组克隆形成率明显低于对照组(P<0.05)；MTT实验显示实验组各个时间点吸光度值均低于对照组(P<0.05)；transwell迁移实验表明实验组穿膜细胞数明显少于对照组(P<0.05)。结论 miR-96可抑制前列腺细胞的增殖和迁移能力，可能参与前列腺癌的发生、发展。

    前列腺癌；m icroRNA-96；增殖；迁移

    前列腺癌是一种常见恶性泌尿系统肿瘤，全球范围内每年约有20万例患者死于前列腺癌[1]。前列腺癌的发病原因迄今仍不清楚。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类由内源性基因编码，长度为19～22个核苷酸的非编码小分子单链RNA。目前，研究发现，miRNA在多种肿瘤中异常表达[2-5]，与恶性肿瘤关系密切，大约有调控miRNA编码基因位的52%位于肿瘤相关染色体区域[6]。已有研究证明，miR-96在多种肿瘤中低表达，如：膀胱癌、乳腺癌、直肠癌等，是潜在的肿瘤抑制因子[7-11]。本实验通过构建过表达miR-96的慢病毒载体来感染前列腺癌DU-145细胞株，以构建过表达miR-96的前列腺癌细胞稳转细胞株，并分别进行克隆形成实验、MTT实验、transwell迁移实验，研究miR-96对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响。

    1 材料与方法

    1.1m iR-96慢病毒质粒构建与包装

    实验所需重组穿梭质粒LV3和包装质粒均由上海吉玛制药技术有限公司制备。LV3质粒携带荧光蛋白表达基因及嘌呤霉素抗性基因。miR-96基因片段的导入及病毒包装由上海吉玛制药技术有限公司完成 ......