陈博 谢琳

    1.广东医科大学东莞校区生理科学实验室，广东东莞523808；

    2.广东医科大学东莞校区基础医学院，广东东莞523808

    蛙血清小分子肽的分离鉴定及生物活性检测

    陈博1谢琳2▲

    1.广东医科大学东莞校区生理科学实验室，广东东莞523808；

    2.广东医科大学东莞校区基础医学院，广东东莞523808

    目的分离和鉴定蛙血清去蛋白提取物中的小分子肽，检测其生物活性。方法用超滤法收集蛙血清中相对分子质量为1000～3000的组分；用RP-HPLC对超滤组分进行分离纯化；用串联质谱法分析鉴定小分子肽的分子质量；用呼吸检压仪测定并计算肝细胞呼吸活性和刺激指数。结果将相对分子质量为1638的小分子肽的二级质谱数据经处理后在数据库搜索，没有搜索到相关肽的信息，可能是新发现的肽。呼吸活性检测显示小分子肽有很强的呼吸活性，氧系数(QO2)≥4.0μLO2/(mg·h)，刺激指数(SI)≥2.5，强于小牛血清去蛋白注射液。结论蛙血清小分子肽是一种新发现的肽，相对分子质量为1638，其药效可能优于小牛血清去蛋白注射液。

    蛙血清；小分子肽；呼吸活性

    研究表明，动物血清的主要药理活性成分是小分子肽[1]。笔者的前期研究发现蛙血清去蛋白提取物能提高心、脑组织对缺氧的耐受力[2]，能保护心、脑缺血再灌注损伤[3-4]，说明其含有对心脑缺血缺氧性损伤有保护作用的小分子肽类物质。因此，本研究从蛙血清去蛋白提取物中分离并纯化其中的小分子肽，鉴定小分子肽的分子质量，以期确定其分子结构和名称，并通过测定和计算小分子肽的呼吸活性和刺激指数(SI)，探讨该小分子肽的药效。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级雄性豚鼠1只，体重250～350 g，由广东医学院实验动物中心提供[合格证号：SYXK(粤)2013-0007]。

    1.2 药品试剂

    色谱纯乙腈(北京汇海科仪科技有限公司)；三氟乙酸(TFA，Sigma公司)；10%氢氧化钠溶液(分析纯，广州化学试剂厂)；Soerensen缓冲液(0.0667 mol/L)：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O，分析纯，广州化学试剂厂)9.72 g和磷酸二氢钾(KH2PO4，分析纯，广州化学试剂厂)1.65 g加双蒸水至1000 m L，磷酸调pH值到7.4；Brodie测压液：取氯化钠(分析纯，广州化学试剂厂)23 g，牛胆酸钠(分析纯，北京化学试剂公司)5 g，伊文兰(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)100mg ......