张浩然 乔旭旭 毕明宏 翟云芝 钱立宇 潘成武 赵论

    [摘要] 目的 探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下，对破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用，并研究其可能机制。 方法 构建DEPTOR shRNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达，Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达。构建共培养体系，分三组：THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR shRNA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变，应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体(CTR)和组织蛋白酶(Cathepsin)-K mRNA表达水平。 结果 DEPTOR shRNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达(P < 0.05)，DEPTOR shRNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降(P < 0.05)。THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化，CTR和Cathepsin-K基因表达上调(P < 0.05)；DEPTOR shRNA共培養条件下可抑制THP-1细胞向破骨样细胞分化，CTR和Cathepsin-K基因表达减弱，差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 DEPTOR shRNA能明显抑制共培养体系中THP-1细胞的破骨样分化，该作用可能与DEPTOR下调RPMI-8226细胞RANKL有关，抑制自噬可阻碍破骨细胞的分化成熟。

    [关键词] 骨髓瘤骨病；DEPTOR；RNA干扰；自噬；THP-1

    [中图分类号] R733.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2018)02(a)-0018-04 ......