刘雪凯 王迎时 辛勤 高雨菡

    [摘要] 目的 研究儿童EB病毒(EBV)感染引起外周血淋巴细胞亚群及T淋巴细胞功能的变化，并探讨血清EBV DNA载量与淋巴细胞亚群变化的关系。 方法 选取航天中心医院(以下简称“我院”)2015年1月～2018年7月收治的25例EBV感染患儿作为感染组;另选我院同期体检的25名健康者作为对照组。采用流式细胞术检测外周血中淋巴细胞亚群及CD8+ T淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B的表达情况。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测血清EBV DNA载量。 结果 感染组外周血CD3+、CD8+细胞比值及绝对值明显高于对照组(P 0.05)，而感染组CD4/CD8比值显著低于对照组(P 0.05)。CD19+细胞比值及绝对值均低于对照组(P 0.05)。与对照组比较，感染组PBMC的IFN-γ分泌增多(P 1×103拷贝/mL，患儿血清EBV衣壳抗原IgM检测呈阳性;③患儿家属自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：①合并心肌炎、肝炎、溶血性贫血及血小板减少的危急病情;②入院前有相关免疫调节治疗。感染组男14例，女11例;年龄1～12岁，平均(4.5±0.6)岁。另取我院同期体检健康者25名为对照组，男15名，女10名;年龄1～12岁，平均(5.3±0.8)岁;体检者近期均无感染及传染病症状。两组年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准。

    1.2 仪器与试剂

    BriCyte E6流式细胞仪及原装配套抗体、溶血剂和质控物(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司);ABI 7500实时荧光定量PCR分析仪(Thermo Fisher)，相关检测试剂(生产批号：p1101706004)购于天隆科技公司;抗体包括T淋巴细胞抗体试剂：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-perCP/CD4-APC;B淋巴细胞抗体试剂：CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC(批號：2017040100)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4) ELISA试剂盒购(生产批号：20141026)购自美国R&D公司;Anti-human perforin(生产批号：563762)、Anti-human granzyme B(生产批号：560211)、Anti-human CD8(生产批号：561952)、IC Fixation Buffer、10×Permeabilization Buffer(生产批号：554715)购于美国BD公司 ......