张小平 于 哲 胥 云 闫 康 廖 博 周 勇 高铜拴

    解放军空军军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所，陕西西安 710032

    骨肉瘤是一种起源于间叶组织的恶性肿瘤，多见于儿童和青少年，好发于血运丰富的长骨干骺端，具有恶性程度高、转移发生早、病情进展迅速且病死率高等特点，临床治疗的失败率和死亡率较高[1]。骨肉瘤是极为难治的骨科肿瘤，其高转移和侵袭性导致炎症浸润和淋巴结转移。骨肉瘤的发生、发展是个复杂的过程，其中炎性因子的浸润、成纤维细胞的激活、MAKP 信号通路的活化等，都促进其增殖和转移能力[2]。研究表明，PI3K/p-Smad7 信号通路在胃癌、结肠癌和肝癌等肿瘤组织中，可以促进肿瘤细胞增殖和侵袭作用[3-4]。PI3K/p-Smad7 可以激活肿瘤上皮细胞间质转型的发生，同时促进肿瘤干细胞的激活和转化，有文献分别报道了PI3K 在骨肉瘤中的促癌作用和p-Smad7 对骨肉瘤的高转移和侵袭性影响[5]。但是PI3K 和p-Smad7 联合形成的分子信号通路间的相互作用和相关性，以及两者对骨肉瘤增殖作用影响尚不完全明确。因此，本研究采用骨肉瘤患者癌组织和骨肉瘤细胞系MG-63，探讨PI3K 及p-Smad7 在骨肉瘤中的表达及其作用。

    1 材料与方法

    1.1 研究对象

    选取2017 年1 月～2018 年10 月解放军空军军医大学唐都医院(以下简称“我院”)骨科收治的60 例骨肉瘤患者(骨肉瘤组织)和同期60 例软骨组织(正常组织)为研究对象。纳入标准：首次就诊，且经我院病理检验科诊断证实，均未经任何治疗。排除标准：①患有严重传染性疾病和血液传染病；②依从性差，无法配合研究者；③合并严重感染、心脑血管疾病以及肝肾功能严重障碍者；④合并其他骨病或系统性疾病。本研究方法和目的均告知患者和家属，并签署知情同意书，研究获得我院医学伦理委员会批准。

    1.2 材料

    骨肉瘤细胞系MG-63 购自中国科学院上海细胞库；蛋白定量试剂盒(P503021-0500)、SDS 凝胶试剂盒(P0012A)、细胞裂解液(P0013)、结晶紫(P8470-25g)均购自上海吉玛生物有限公司；DMEM(SH30021)、胎牛血清(SH30406)、胰蛋白酶消化液(SV30042)购自美国HyClone；青链霉素混合液(P1400)、4%多聚甲醛(P1110)、苯胺蓝(28631-66-5)和苏木精(C0107)均购自武汉依科有限公司；Actin(ab179467)、PI3K(ab32089)、p-Smad7(ab114358)和兔二抗(ab150077)购自英国Abcam ......