简咏男 郑文兰

    1.贵州中医药大学研究生院，贵州贵阳 550002；2.贵州中医药大学第一附属医院妇科，贵州贵阳 550000

    异位妊娠(ectopic pregnancy，EP)是指孕卵在子宫体腔以外着床，其中输卵管妊娠最为常见，占95%左右[1]。随着患者逐渐年轻化及二孩政策的开放，要求保留生育功能的患者增多[2]，因此中医药的应用也受到了相应的重视。加味宫外孕Ⅱ号方治疗EP 在贵州中医药大学第一附属医院应用多年，其临床疗效好，前期研究表明该方有破坏滋养细胞超微结构、诱导细胞凋亡的作用[3]，但杀胚的具体机制尚不清楚。据文献报道，通过内质网应激(ERS)诱导细胞凋亡，是一条新的细胞凋亡信号传导通路，许多疾病的防治都与过度ERS 引起的细胞凋亡有关[4]，但加味宫外孕Ⅱ号方是否通过ERS 途径发挥药效来治疗EP 尚未见报道。本研究以人绒毛膜滋养层细胞株(HTR-8/SVneo)细胞作为研究对象，采用Western blot 及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法，探讨加味宫外孕Ⅱ号方对滋养细胞凋亡的相关机制，为临床上加味宫外孕Ⅱ号方保守治疗EP 提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物与细胞

    SPF 级SD 健康雌性大鼠36 只，体重180～220 g，购于湖北省实验动物研究中心，本实验通过湖北省实验动物管理与使用委员会批准(20182901)，实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2015-0018，每次灌胃前禁食12 h，不禁水，给药2 h 后恢复食物；HTR-8/SVneo购于华中科技大学同济医学院附属协和医院。

    1.2 实验药物

    加味宫外孕Ⅱ号方(丹参15 g、赤芍15 g、桃仁9 g、三棱9 g、莪术9 g、蜈蚣4 g、全蝎6 g、土鳖虫10 g、紫草25 g)由贵州中医药大学第一附属医院中药房提供，水煎浓缩成3 g/mL 的药液，4℃保存备用；甲氨喋呤：广东岭南制药有限公司，批号：872016。

    1.3 主要仪器及试剂

    qRT-PCR 仪(美国ABI)；离心机(湖南湘仪)；BCA 蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司；P0010)；逆转录试剂盒及荧光定量试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司；Q111-02)；引物合成(武汉擎科生物技术有限公司)；兔抗GAPDH 一抗(杭州贤至生物科技有限公司；AB-P-R 001)；兔抗IRE1一抗(武汉三鹰生物技术有限公司；27528-1-AP)；兔抗TRAF2、ASK1 一抗及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(武汉博士德生物工程有限公司；BA1444-2、BM4220、BA1054)；兔抗JNK1、JNK2、p-JNK 一抗(英国Abcam；ab199380、ab76125、ab4821) ......