张建军 蔡龙俊 蔡维奇

    1.江苏师范大学科文学院，江苏徐州 221132；2.徐州医科大学附属宿迁医院暨南京鼓楼医院集团宿迁医院泌尿外科，江苏宿迁 223800

    膀胱癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤[1]。近年来，膀胱癌的发病率和病死率呈上升态势[2-3]。在中国，膀胱癌仍是发病率最高的泌尿生殖系肿瘤[3-5]。以溶瘤病毒为基础的免疫治疗近期在膀胱癌治疗中取得了较大的进展[6-7]。

    黑色素瘤相关抗原A10(melanoma-associated antigen A10，MAGE-A10)是一种肿瘤相关抗原，可作为膀胱肿瘤特异性免疫治疗的新靶点[8]。人β 防御素2(human beta defensin 2，hβD-2)被认为是人体内环境对外来病原微生物免疫的第一道防线[9]。应用hβD-2的基因治疗能够介导抗肿瘤免疫，发挥抗肿瘤作用[10]。溶瘤病毒SG502 对膀胱癌具有较高靶向性的，其加载了人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)启动子和缺氧诱导因子-1(hypoxiainducible factor 1，HIF-1)启动子[11]。在溶瘤病毒SG502的基础上，本课题组应用PCR 技术将MAGE-A10 和hβD-2 基因片段成功连接到质粒pSG502 中，并将获得的特异性溶瘤腺病毒命名为SG502-MAGE-A10-hβD-2。

    本研究拟探究SG502-MAGE-A10-hβD-2 对膀胱癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞及实验动物

    人膀胱癌细胞系T24、鼠膀胱癌细胞系MB49、人黑色素瘤细胞系LiBr 及人胚肾细胞系HEK293 购于中国科学院上海细胞库。6～7 周龄清洁级C57BL/6 雄性小鼠购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，体重18～22 g，许可证号：SCXK(鲁)20190003，合格证号：1107262011002579。本课题动物实验经徐州医科大学动物实验伦理中心批准(批准号：xz2020050903L)。

    1.2 主要试剂及仪器

    溶瘤病毒SG502 及质粒pSG502 购自上海肝胆外科医院病毒与基因治疗中心。质粒pUC57(B522201)、病毒骨架质粒pPE3(B6100016)、胶回收试剂盒(SK8131)、质粒小样提取试剂盒(B519196-0010)购自上海生物工程公司。DNA 连接酶(2011A)、限制性内切酶(1068A)购自TaKaRa 公司 ......