张 鹤 赵慧霞 曾志艳 李庆艳 云 超 关 娜 李秋文 肖文华

    解放军总医院第四医学中心肿瘤内科，北京 100048

    肝细胞肝癌是我国常见恶性肿瘤，严重威胁人们的健康和生命。当前抗血管生成联合免疫检查点抑制剂(immune-check point inhibitor，ICI)的治疗使晚期肝癌患者的平均生存时间超过1 年[1]，但仍有提升的空间。ICI 的治疗目的主要是释放细胞毒性T 淋巴细胞(cytotoxic T cell，CTL)的杀瘤能力；产生CTL 必须具有的特异性肿瘤抗原，尤其是肿瘤新抗原(tumour neoantigen，TNA)[2]。当前TNA 定义是肿瘤基因编码区非同义突变产生的新的癌蛋白[2]；然而，该定义并不全面，忽略了另一大类受表观遗传调控的、与TNA 同样具有肿瘤特异性和强大免疫原性的新抗原肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen，CTA)。CTAs 是一大类只在睾丸和肿瘤中表达的免疫原性较强的肿瘤相对特异抗原，因高甲基化而沉默。由于肿瘤的广泛低甲基化，导致位于X 染色体的CTAs 基因不同程度去甲基化，部分沉默的CTAs 重新开放表达并诱导免疫反应[3]。但是，由于CTAs 表达水平受其去甲基化程度的影响，同一肿瘤不同个体，甚至同一肿瘤不同亚克隆瘤细胞的CTAs 表达存在明显的异质性。长期的低浓度CTAs 慢性刺激将导致CTL 失能或衰竭，或CTAs 被再甲基化而再次沉默从而影响免疫治疗效果或产生继发性耐药[3-4]。因此，新生CTAs(novel cancer-testis antigens，nCTAs)的产生是提高免疫治疗或逆转免疫耐药的重要措施之一。5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine，5-aza-CdR)是DNA 甲基转移酶抑制剂，能使CTAs去甲基化并重新和持续表达[5]，但由于该药存在细胞毒性，限制了临床广泛应用。本文目的是探讨小剂量的5-aza-CdR 能否诱导肝癌细胞表达nCTAs，为未来制订肝癌的免疫治疗及免疫耐药的再挑战提供对策。

    1 材料与方法

    1.1 肝癌细胞株和主要试剂

    肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721 和BEL-7402 购自中国细胞收藏中心，MHCC97L 和MHCC97M3 购自复旦大学中山医院肝癌研究所；胎牛血清(北京中科康源生物科技公司，货号：#13011-611)；兔抗人CT10抗体(英国Abcam 公司，货号ab209667)；鼠抗人-tubulin 抗体和羊抗兔二抗(美国Sigma 公司 ......