hsa_circ_0006988诱导胶质瘤细胞铁死亡的机制研究
货号,试剂盒,1材料与方法,1实验材料,2实验方法,3统计学方法,2结果,1circ_0006988在胶质瘤细胞的表达,2下调circ_0006988对胶质瘤细胞铁死亡的作用,3下调circ_00
赵水强 孟大伟 陈国强 李亮亮 王志文 胡甜甜 牛建星北京航空总医院神经外科,北京 100012
胶质瘤属于神经系统恶性肿瘤,手术切除、放疗、化疗等常见治疗手段虽然能够在一定程度上缓解胶质瘤进展,但治疗后的多数患者生存时间低于5 年,寻找有效方法抑制胶质瘤具有重大研究价值[1-2]。铁死亡是近些年来发现的细胞程序性死亡,氧化应激、Fe2+含量增多是其较为典型的特征,诱导肿瘤细胞铁死亡也成为肿瘤治疗中的研究热点[3-4]。circRNA 是高度稳定的非编码RNA,其是由前体RNA 经过反向剪接而产生的,circRNA 在人体内的多种组织中表达,并且有多种生物学功能[5-6]。研究证明[7-8],肿瘤的进展也受到circRNA 的表达调控,靶向改变circRNA 的表达可能是肿瘤治疗的潜在途径之一。既往文献[5]显示,hsa_circ_0006988(circ_0006988)促进非小细胞肺癌细胞增殖,诱导肿瘤生长。目前尚未发现circ_0006988在胶质瘤细胞铁死亡中的作用研究。Nrf2/GPX4 信号可增加机体抗氧化能力,参与氧化应激、铁死亡、肿瘤等生理、病理过程[9-11]。本实验探讨下调hsa_circ_0006988 作用于Nrf2/GPX4 信号诱导胶质瘤细胞铁死亡的机制,为胶质瘤靶向基因治疗提供参考思路,为研究胶质瘤分子发生机制提供数据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
脑正常胶质细胞HEB(BNCC358606),购自上海抚生实业有限公司;胶质瘤细胞A172(货号:CL0016),武汉普诺赛生命科技有限公司;胶质瘤细胞SHG44(货号:CTCC-007-0459),购自湖南丰晖生物科技有限公司;胶质瘤细胞CHG-5(货号:YS1481M),购自美 国ATCC;siRNA control、circ_0006988 siRNA、Nrf2 siRNA、阴性对照载体(pcDNA)、Nrf2 过表达载体(pcDNA-Nrf2),湖南普拉特泽生物科技有限公司提供;兔抗转铁蛋白受体(trasferrin-receptor,TFR)抗体(货号:ab185550)、兔抗Ferritin 抗体(货号:ab75973)、兔抗Nrf2 抗体(货号:ab62352),兔抗转铁蛋白(Trans ferrin,TF)抗体(货号:ab277635),Fe2+检测试剂盒(货号:ab83366)购自美国Abcam;兔抗GPX4 抗体(货号:MABS1274)购自美国Sigma 公司;cDNA 第一链合成试剂盒(货号:K1622)、ROS 测定试剂盒(货号:E004-1-1) ......
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