赵水强 孟大伟 陈国强 李亮亮 王志文 胡甜甜 牛建星

    北京航空总医院神经外科，北京 100012

    胶质瘤属于神经系统恶性肿瘤，手术切除、放疗、化疗等常见治疗手段虽然能够在一定程度上缓解胶质瘤进展，但治疗后的多数患者生存时间低于5 年，寻找有效方法抑制胶质瘤具有重大研究价值[1-2]。铁死亡是近些年来发现的细胞程序性死亡，氧化应激、Fe2+含量增多是其较为典型的特征，诱导肿瘤细胞铁死亡也成为肿瘤治疗中的研究热点[3-4]。circRNA 是高度稳定的非编码RNA，其是由前体RNA 经过反向剪接而产生的，circRNA 在人体内的多种组织中表达，并且有多种生物学功能[5-6]。研究证明[7-8]，肿瘤的进展也受到circRNA 的表达调控，靶向改变circRNA 的表达可能是肿瘤治疗的潜在途径之一。既往文献[5]显示，hsa_circ_0006988(circ_0006988)促进非小细胞肺癌细胞增殖，诱导肿瘤生长。目前尚未发现circ_0006988在胶质瘤细胞铁死亡中的作用研究。Nrf2/GPX4 信号可增加机体抗氧化能力，参与氧化应激、铁死亡、肿瘤等生理、病理过程[9-11]。本实验探讨下调hsa_circ_0006988 作用于Nrf2/GPX4 信号诱导胶质瘤细胞铁死亡的机制，为胶质瘤靶向基因治疗提供参考思路，为研究胶质瘤分子发生机制提供数据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    脑正常胶质细胞HEB(BNCC358606)，购自上海抚生实业有限公司；胶质瘤细胞A172(货号：CL0016)，武汉普诺赛生命科技有限公司；胶质瘤细胞SHG44(货号：CTCC-007-0459)，购自湖南丰晖生物科技有限公司；胶质瘤细胞CHG-5(货号：YS1481M)，购自美 国ATCC；siRNA control、circ_0006988 siRNA、Nrf2 siRNA、阴性对照载体(pcDNA)、Nrf2 过表达载体(pcDNA-Nrf2)，湖南普拉特泽生物科技有限公司提供；兔抗转铁蛋白受体(trasferrin-receptor，TFR)抗体(货号：ab185550)、兔抗Ferritin 抗体(货号：ab75973)、兔抗Nrf2 抗体(货号：ab62352)，兔抗转铁蛋白(Trans ferrin,TF)抗体(货号：ab277635)，Fe2+检测试剂盒(货号：ab83366)购自美国Abcam；兔抗GPX4 抗体(货号：MABS1274)购自美国Sigma 公司；cDNA 第一链合成试剂盒(货号：K1622)、ROS 测定试剂盒(货号：E004-1-1) ......