周 俊 郭长青 王庆甫

    1.北京中医药大学研究生院，北京 100029；2.北京中医药大学针灸推拿学院，北京 100029；3.北京中医药大学第三附属医院筋伤科，北京 100029

    膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是一种以膝关节疼痛、畸形、僵硬和功能障碍为主要症状的下肢骨退行性病变，是导致下肢残疾的十大常见疾病之一[1-5]。TLRs/NF-κB 通路介导的滑膜炎症是KOA 的主要病理变化[6-9]。然而KOA 滑膜炎症的发病机制目前尚不明确。外泌体是由细胞分泌的脂质双层膜小囊泡，可通过其富含的各类miRNA 对于Toll 样受体2(Toll-like receptor，TLR2)的抑制作用，调控TLRs/NF-κB 信号通路，参与炎症反应过程[10-13]。本研究拟通过动物实验，观察滑膜组织两种主要组成细胞的炎性外泌体对于家兔膝关节滑膜组织的影响，探讨在KOA 滑膜炎症过程中两种滑膜细胞来源外泌体对于TLRs/NF-κB通路的调控作用。

    1 对象与方法

    1.1 实验动物

    健康成年家兔20 只，体重2.0～2.5 kg，购自北京金牧阳实验动物养殖有限公司，许可证号：SCXK(京)2015-0005。所有家兔均饲养于中国中医科学院医学动物实验中心。清洁级饲养，实验室平均室温(22±1)℃，空气湿度40%～50%。本实验通过中国中医科学院动物护理和使用委员会批准(20193003)。按照《实验动物护理和使用指南》福利伦理严格执行。

    1.2 主要试剂

    人成纤维样滑膜细胞系及巨噬样滑膜细胞系(上海ATCC 细胞库，批号：BFN680323)；DMEM 培养基、胎牛血清(invitrogen，批号：C111965500BT)；脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)(Sigma 公司，批号：L2880)；外泌体提取收集试剂盒(北京恩泽康泰生物科技有限公司 ......