Cohn’sF-Ⅳ沉淀中人血高密度脂蛋白的溶解试验及载脂蛋白A-I的含量观察
[关键词]高密度脂蛋白；载脂蛋白A-I；F-Ⅳ沉淀
国内外大量研究表明，高密度脂蛋白(HDL)与冠心病(CHI)的发生呈负相关，作为从根本上防治CHD的新药，HDL已经显示出良好的开发前景。笔者研究的从人血浆中直接提取人血HDL的工艺已经成熟。但由于受工艺限制，继续开发有一定难度，而且国内外广泛采用Cohn's低温乙醇法及其改良法分离血浆蛋白。为有效利用血浆资源，笔者考察了从Cohm's法废弃组分中提取HDL的可行性。本文以测定人血HDL的主要载脂蛋白A-I(apoA-1)为指标，对Cohn's法组分四(F一Ⅳ)沉淀中人血HDL的溶解条件及apoA-I的含量进行了研究。
1 材料与方法
1.1 F-Ⅳ沉淀 采用由常规生产的新鲜及冰冻保存的Cohn'sF-Ⅳ沉淀，用不同的溶解液，按相应比例溶解、过滤，除去不溶物，测定溶解液中apoA-I含量。
, http://www.100md.com
1.2 稀释倍数对溶解的影响以蒸馏水为溶解液，常温下分别稀释成1：10、1：15(质量g与体积玎d的比值)溶解，测定apoA—I含量。
1.3 温度对溶解的影响以蒸馏水为溶解液，分别在37℃、常温及0℃条件下溶解，测定apoA-I含量。
1.4 离子强度对溶解的影响 以蒸馏水为溶解液，将NaCJ调成不同离子强度，测定apoA-I含量。
1.5 pH值对溶解的影响NaCl溶液常温下溶解并分别以0.5M HCI及0.5M NaOH液调成不同的pH值。
1.6 apoA-I测定采用免疫圆周扩散测定法。
2 结果
2.1 稀释倍数对溶解的影响稀释倍数1：10时，每克F-Ⅳ中apoA—I含量(22.29±0.93)mg，1：15时(21.5±4.03)mg。经t检验，两种稀释倍数无显著性差异。
, 百拇医药
2.2 温度对溶解的影响。
经比较，以蒸馏水为溶解液，3个温度下溶解度相差不大。当加入NaCI离子强度升高时，经t检验，37℃与室温、室温与0℃比较均有显著性差异(P<0.05)。
2.3 离子强度对溶解的影响。
经t检验，蒸馏水与0.9%NaCl、1.5%NaCl溶解均差异显著，结果证实离子强度的增加对F一Ⅳ中HDL的溶解不利。
2.4 pH值对溶解的影响在oH值为5.5、6.5、7.0、7.5和8.0时，每克F一Ⅳ中apog—I含量为(26.43±5.11)mg、(26.02±3.86)mg、(24.40±3.86)mg、(27.22±10 23)mg和(27.48±7.21)mg。经t检验，5个pH值对于F一Ⅳ溶出量无显著差异。
, 百拇医药 2.5 常温下以蒸馏水为溶解液，apoA—I的溶出量经20次溶解实验，每克F-Ⅳ沉淀中apoA—I(mg)的溶出量数值如下：21.11、28.05、20.76、23 60、28.40、32.62、21.90、30.13、21.64729.07、22.48、28.05、20.76、19.99、34.46、22.39、32.58、23.12、21.28、16.00，平均为(24.92±5.12)mg。
2.6 溶解液中apoB100的测定常温下以蒸馏水为溶解液，4次实验所得数值如下：每克F一Ⅳ中含apoBloo的量为1.26、1.45、2.08、1.88，平均为(1.67±0.38)mg。
3 讨论
溶解条件的选择将影响apoA—I的溶解，最终会影响其吸收率。本文探讨了一定稀释倍数、温度、离子强度、pH值对溶解的影响。实验证明，以蒸馏水为溶解液，稀释倍数、温度及一定的pH值范围(5.5～8.0)对溶解无影响。而离子强度增高则不利于HDL的溶解。
从实际可操作性出发，应该选择室温操作，以蒸馏水为溶解液，1：15的稀释倍数，调节pH=7.0，此法可以从每克F一Ⅳ中溶解出24.92=5.12mg apoA—I，大约相当于每百毫升原血浆中的48.84-52 33mg apoA—I，而apoBioo含量极微，由此可以看出以F-Ⅳ为原料提取HDL是大有潜力的。, 百拇医药(任海波 迟 镝)
国内外大量研究表明，高密度脂蛋白(HDL)与冠心病(CHI)的发生呈负相关，作为从根本上防治CHD的新药，HDL已经显示出良好的开发前景。笔者研究的从人血浆中直接提取人血HDL的工艺已经成熟。但由于受工艺限制，继续开发有一定难度，而且国内外广泛采用Cohn's低温乙醇法及其改良法分离血浆蛋白。为有效利用血浆资源，笔者考察了从Cohm's法废弃组分中提取HDL的可行性。本文以测定人血HDL的主要载脂蛋白A-I(apoA-1)为指标，对Cohn's法组分四(F一Ⅳ)沉淀中人血HDL的溶解条件及apoA-I的含量进行了研究。
1 材料与方法
1.1 F-Ⅳ沉淀 采用由常规生产的新鲜及冰冻保存的Cohn'sF-Ⅳ沉淀，用不同的溶解液，按相应比例溶解、过滤，除去不溶物，测定溶解液中apoA-I含量。
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1.2 稀释倍数对溶解的影响以蒸馏水为溶解液，常温下分别稀释成1：10、1：15(质量g与体积玎d的比值)溶解，测定apoA—I含量。
1.3 温度对溶解的影响以蒸馏水为溶解液，分别在37℃、常温及0℃条件下溶解，测定apoA-I含量。
1.4 离子强度对溶解的影响 以蒸馏水为溶解液，将NaCJ调成不同离子强度，测定apoA-I含量。
1.5 pH值对溶解的影响NaCl溶液常温下溶解并分别以0.5M HCI及0.5M NaOH液调成不同的pH值。
1.6 apoA-I测定采用免疫圆周扩散测定法。
2 结果
2.1 稀释倍数对溶解的影响稀释倍数1：10时，每克F-Ⅳ中apoA—I含量(22.29±0.93)mg，1：15时(21.5±4.03)mg。经t检验，两种稀释倍数无显著性差异。
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2.2 温度对溶解的影响。
经比较，以蒸馏水为溶解液，3个温度下溶解度相差不大。当加入NaCI离子强度升高时，经t检验，37℃与室温、室温与0℃比较均有显著性差异(P<0.05)。
2.3 离子强度对溶解的影响。
经t检验，蒸馏水与0.9%NaCl、1.5%NaCl溶解均差异显著，结果证实离子强度的增加对F一Ⅳ中HDL的溶解不利。
2.4 pH值对溶解的影响在oH值为5.5、6.5、7.0、7.5和8.0时，每克F一Ⅳ中apog—I含量为(26.43±5.11)mg、(26.02±3.86)mg、(24.40±3.86)mg、(27.22±10 23)mg和(27.48±7.21)mg。经t检验，5个pH值对于F一Ⅳ溶出量无显著差异。
, 百拇医药 2.5 常温下以蒸馏水为溶解液，apoA—I的溶出量经20次溶解实验，每克F-Ⅳ沉淀中apoA—I(mg)的溶出量数值如下：21.11、28.05、20.76、23 60、28.40、32.62、21.90、30.13、21.64729.07、22.48、28.05、20.76、19.99、34.46、22.39、32.58、23.12、21.28、16.00，平均为(24.92±5.12)mg。
2.6 溶解液中apoB100的测定常温下以蒸馏水为溶解液，4次实验所得数值如下：每克F一Ⅳ中含apoBloo的量为1.26、1.45、2.08、1.88，平均为(1.67±0.38)mg。
3 讨论
溶解条件的选择将影响apoA—I的溶解，最终会影响其吸收率。本文探讨了一定稀释倍数、温度、离子强度、pH值对溶解的影响。实验证明，以蒸馏水为溶解液，稀释倍数、温度及一定的pH值范围(5.5～8.0)对溶解无影响。而离子强度增高则不利于HDL的溶解。
从实际可操作性出发，应该选择室温操作，以蒸馏水为溶解液，1：15的稀释倍数，调节pH=7.0，此法可以从每克F一Ⅳ中溶解出24.92=5.12mg apoA—I，大约相当于每百毫升原血浆中的48.84-52 33mg apoA—I，而apoBioo含量极微，由此可以看出以F-Ⅳ为原料提取HDL是大有潜力的。, 百拇医药(任海波 迟 镝)