AQP1、AQP2及AQP3在人睾丸肿瘤组织中表达的检测
 |
 |
摘要：目的 研究水通道蛋白(Aquaporin，AQP)1、2、3在人睾丸肿瘤组织的分布及表达情况。方法 选取经手术切取的睾丸肿瘤组织10例，应用免疫组织化学S-P法检测AQPI、AQP2、AQP3的分布及表达。结果 在睾丸肿瘤组织中AQPI主要表达在微血管内皮细胞；AQP2及AQP3主要表达在睾丸肿瘤细胞的胞膜及胞质内。结论 AQP1、AQP2及AQP3表达于睾丸肿瘤组织，说明睾丸肿瘤组织水通道蛋白表达增加。
关键词：内皮细胞；微血管；水通道蛋白
水通道是广泛存在于哺乳动物和植物细胞膜上转运水的特异性通道，由一系列具有同源性的内在膜蛋白家族成员组成，即水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)。目前在哺乳动物已发现13种水通道蛋白(AQPo～12)。现在已从分子水平解释AQPs在很多细胞质膜对水分子的快速转运，并进一步研究AQV在不同组织的分布情况，AQPs在上皮细胞、内皮细胞和其他组织的特异性分布、表达可能是疾病发生、发展的潜在因素。近年来AQPs与疾病关系已成为研究热点，例如AQP2：基因突变诱发尿崩症等。近年来有学者对AQPs在小鼠生殖系统分布情况进行研究，已取得一定进展。本研究通过免疫组织化学S-P法了解AQP1、AQP2及AQP3在睾丸肿瘤组织的分布及表达情况，为进一步了解AQP与睾丸肿瘤关系提供了理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 睾丸肿瘤组织标本10例，病理诊断为精原细胞瘤。来自吉林大学第二医院泌尿外科2005年3月～2006年3月行睾丸肿瘤切除术的患者，年龄30~50岁。1.2 方法 采用s-P免疫组织化学染色法。兔抗人AQP1、AQP2及AQP3多克隆抗体购自美国Santa公司，S-P试剂盒购自福州迈新公司。组织标本以4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，5pm连续切片，分别行HE染色盒免疫组织化学染色。石蜡切片梯度酒精脱蜡后，3%H2O2孵育10Min，消除内源性过氧化物酶活性，微波修复抗原10min，滴加非免疫血清，室温孵育20min，弃去血清，滴加1:100的兔抗AQP1,或AQP2或AQP3多克隆抗体，4℃过夜，经0.1ml/L磷酸缓冲液(PBS)洗涤后行免疫组化染色，3，3’一二氨基联苯胺(DAB)显色，Mayer苏木素复染，封片。以胞膜或胞浆有棕黄色染色为阳性细胞。所有切片在光学显微镜下观察，取染色良好(阳性细胞染色清晰，背景染色很低)的组织切片进行照相。
, 百拇医药
2 结果
所有切片染色背景清晰，AQP1、AQP2及AQP3阳性反应呈棕黄色，主要存在于细胞膜、细胞浆及间质组织内。睾丸肿瘤组织微血管内皮细胞有AQPl表达(图1)，AQP2表达于肿瘤细胞胞膜及细胞质内(图2)，AQp3表达于肿瘤细胞膜及周围间质内(图3)。
3 讨论
AQPs在组织中的分布有一显著特点，即各种AQP有其相对的组织细胞分布谱和细胞表达位置，同一脏器可以拥有多种AQPs，且同一AQP也可以分布于多种组织细胞中，但在同一细胞定位上，无2种以上的AQP重叠表达，说明每种AQP具有相对特殊的定位和作用，可以满足不同组织和细胞的代谢需要。国内学者已对小鼠正常睾丸组织AOP的表达进行了初步研究，并证实AQP3、5、7、8、9表达在正常睾丸组织。本实验室通过实验证实睾丸肿瘤时AQP和AQP2也表达在肿瘤组织中，且AQP1主要定位于微血管的内皮细胞，AQP2和AQP3定位于肿瘤细胞膜、胞质及间质中。
本实验通过免疫组织化学方法研究证实睾丸肿瘤组织有不表达于正常睾丸的AQPl和AQq2的表达。说明睾丸肿瘤组织与正常组织在AQPs的表达上有不同，而国内外鲜有同类研究报道。总之对AQPs在病变组织中变化的研究，为深入了解睾丸肿瘤的发生、发展及治疗提供了一种新的思路和方法。, 百拇医药(崔成国 赫惠新 潘绍惠 金星和)