RNAi在研究EGF生理效应机制中的应用
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【摘要】目的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是发生在mRNA水平上的一种基因沉寂现象，即在外源性双链RNA导入细胞后可以引起细胞内与其同源的mRNA特异性降解，使该基因在RNA水平上被关闭而导致其不表达，即转录后基因沉寂。小干扰RNA(smallinterferringRNA,siRNA)已经发展成为研究基因功能的有效工具，具有相当高的特异性；可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解。而表皮生长因子能诱导成纤维细胞的移动，促进EGF受体激活与推动力产生的分子链接，构成完整的信号传递链，从而使EGF信号完成传递，最终引发一系列的细胞生化反应。
【关键词】RNAi;EGF;siRNAs;EGFR
RNA干扰是上个世纪兴起并发展起来的一种技术，但因其在基因功能研究中的巨大优势和潜力使得其迅速发展，同时其研究也不断深入。RNAi沉默机制主要表现在抗病毒、基因调控、染色质浓缩、转座子沉默、基因组重组等领域，它主要用于高通量的基因功能研究、基因敲除、基因治疗及药物筛选方面[1]。越来越多的科学工作者把它引入到表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,简称EGF)及表皮生长因子受体(EGFreceptor，简称EGFR)的功能研究中。因为此效应机制中存在众多的功能蛋白质，利用RNAi技术对其编码基因进行阻遏，用这一突变型与原野生型比照，便可分析得出此蛋白在整个效应机制中的作用，而且结果很具说服力，因为此种技术本身就很可靠，它是从基因的角度进行操作，排除了在转录翻译过程中容易出现的干扰因素，所以RNAi在研究EGF的效应机制中很具有研究价值且应用前景十分广泛。
1RNAi的作用机理研究
RNA作为核酸，它本身不具有蛋白酶类的任何功能，但它却能在胞内引发如此大的功能变化，其过程相当复杂。目前对其研究已很清楚，dsRNA(doublestrandRNA,>19bp)是RNAi的效应源，其进入细胞后激活胞内自然存在的加工活性，引起对侵入的外源dsRNA具有同源序列的单链RNA降解(包括内源性的mRNA)[2]。研究表明dsRNA开导的同源靶mRNA的RNAi分三步进行[5]：首先，细胞内RnaseⅢ样核酸内切酶(Dicer酶)在ATP供能条件下将长的双链RNA(dsRNA)切割加工成21-25nt的正义和反义链组成的小片段双链RNA-小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA);然后siRNA在ATP参与下被RNA解旋酶解旋为两条单链 ......
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