蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对TGF-β1表达的影响(2)
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1.6 实验分组和给药
荷瘤鼠随机分为4组:生理盐水(NS)组、化疗药(5-Fu)组、蟾毒灵低剂量(Bu L)组、蟾毒灵高剂量(Bu H )组，每组12只，以上各组均为腹腔注射，其中Bu H组1.5 mg/kg；Bu L组为1.0 mg/kg；5-Fu组为24 mg/kg； NS组给予生理盐水20 ml/kg，连续给药6 d，1次/d。
1.7 观察指标及方法 肿瘤生长抑制率：每组取6只，于治疗后第7天处死，游标卡尺测量瘤体最长径(a)和最短径(b),按公式计算肿瘤体积(V)的大小，根据公式V=12ab2计算并比较各组肿瘤生长率。肿瘤生长抑制率:肿瘤生长抑制率=(对照组平均瘤体积-用药组平均瘤体积)/对照组平均瘤体积×100% 。
1.8 小鼠肿瘤凋亡检测 治疗后每组取6只小鼠的肿瘤标本以10%甲醛液固定，石蜡包埋，切片，采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Trminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling，TUNEL脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)。光镜下观察切片的染色反应，结果判断标准[11]为避开坏死区以细胞核有明显棕黄色为阳性细胞。随机选10个高倍视野(×400)，借助网格记数器，细胞数>1 000个以上，计算TUNEL阳性标记指数(TUNELlabeling index, TUNEL-LI)，即凋亡指数。
1.9 肿瘤组织中的TGF-β1检测方法
采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-1过氧化物酶(S-P)方法：石蜡切片脱蜡，柠檬酸盐煮沸热修复法进行抗原修复；加非免疫性动物血清50μl，室温孵育10 min。加一抗caspase-350 μl，4 ℃过夜。加通用型生物素标记羊抗兔IgG 50 μl, 37 ℃孵育15 min ......
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