MAGE-A9基因原核表达系统的构建及其在肝细胞癌中的表达(1)
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【摘要】 目的 扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanoma antigen A9) cDNA ,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗，观察其在肝细胞癌中的定位。方法 从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9 cDNA,插入载体pMD18-T中，测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gIII-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后，制备抗MAGE-A9单抗，免疫组化检测MAGE-A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果 获得AGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白，SDS-PAGE分析其相对分子质量为35 Kd。获得抗MAGE-A9单抗，MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性，统计学分析MAGE-A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论 有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE-A9抗原，且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性，MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。
【关键词】 黑色素瘤抗原；MAGE-A9；RT-PCR；基因克隆；基因表达
Construction of MAGE-A9 gene prokaryotic expression system and its expression in hepatocellular carcinoma
XU Lu ......
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