应用STR-PCR方法快速诊断Down’s综合征
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【摘要】目的探讨应用PCR-STR分型技术快速产前诊断Down′s综合征的方法｡方法选择21号染色体上的4个多态位点D21S1435､D21S11､D21S1270 ､D211412 进行PCR扩增,尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染分型,根据谱带的条数和浓度进行判断是否为21三体｡结果应用此方法可以检出所有的由核型分析确诊的21三体,30例产前诊断筛出3例21三体患儿(有3条带图谱或2∶1图谱)｡结论该方法不用细胞培养,避免放射性标记,并可进行早期的产前诊断,该方法与传统的方法操作比较简单､速度快,是一种产前诊断和大规模筛查21三体的良好方法｡
【关键词】唐氏综合征;基因诊断;短串联重复序列
唐氏综合征(Down′s syndrome,DS)又称先天愚型,21三体综合征,是一种最常见的先天性常染色体数目畸变,发病率为0.12%,产前诊断以羊水细胞染色体核型分析为主,难度较大,周期长,不易普及｡短串联重复序列(short tandem repeat,STR)具有高度的多态性和易于检测､分型而成为第二代DNA分型技术的主要工具｡为此,我们尝试联合应用四个STR位点进行DS的基因诊断和产前诊断,以降低DS的发病率｡
1对象与方法
1.1对象30例经用DS筛查出来的高危孕妇羊水,由上海国际和平妇幼保健院遗传室提供｡
1.2方法
1.2.1DNA提取按Chelex-100 提取羊水细胞DNA[1]｡使用QIAamp DNA Mini Kit(德国),按试剂盒厂家提供的操作步骤提取上清液中游离DNA以代替羊水细胞DNA｡并用岛津紫外分光光度测定DNA浓度｡
1.2.2引物设计及PCR扩增待扩增的21号染色体上的4个STR位点见表1,参照基因数据库(www.gdb.org)对其引物序列进行修改或自行设计,使该4个STR位点引物的退火温度一致(Tm=58℃)｡荧光标记物是每对引物的上游序列5′端用6-FAM荧光染料标记｡用PE2400热循环仪分别扩增各STR位点片段,PCR反应总体积25 μl,含样本DNA 0 ......
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