结构域酵母三杂交诱饵载体的构建及酵母转化
FXRP,KH结构域,N-端结构域,脆性X综合征
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马云 李斌元 徐向红 刘慧婷 贾瑜 何淑雅
【摘要】目的脆性X相关蛋白(FXR1P)是一种RNA结合蛋白,本研究构建了其N-端结构域、KH结构域的酵母三杂交诱饵载体并转化酵母菌株L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2,为筛选这2种结构域的相互作用RNA作基础。方法根据Genebank提供的序列设计引物,以pYESTrp3/FXR1质粒作为模板,扩增分别包含FXR1P N-端结构域、KH结构域的编码区序列,连接到用于酵母三杂交文库筛选的pYESTrp3质粒,得到诱饵质粒,导入大肠杆菌Top10扩增,筛选阳性克隆并提取其中的重组质粒,再转化酵母菌L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2。结果经过测序验证,该重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主菌无毒性,无自激活现象。结论成功构建了能用于酵母三杂交文库筛选的FXR1P蛋白N-端结构域、KH结构域酵母三杂交诱饵载体,为研究这两个结构域的RNA结合功能奠定了基础。
【关键词】 FXRP KH结构域 FXRP N-端结构域 酵母三杂交 脆性X综合征
【基金】国家自然科学基金项目(项目编号:30671172) 衡阳市科技局项目(项目编号:2005KS01-016)
【分类号】R749.94
脆性X综合征(Fragile X syndrome,FXS)是最常见的X连锁遗传性智力障碍性疾病之一,发病原因是FMR1基因的突变导致该基因表达下降或者其编码产物异常[1]。FMR1基因与FXR1/2(Fragile X relatedgene1/2)形成一个基因家族,具有非常相似的序列和分子结构,且均具有RNA结合功能。该家
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[摘要]目的 脆性X相关蛋白(FXRIP)是一种RNA结合蛋白，本研究构建了其N-端结构域、KH结构域的酵母三杂交诱饵载体并转化酵母菌株L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2，为筛选这2种结构域的相互作用RNA作基础。方法根据Genebank提供的序列设计引物，以pYESTrp3/FXR1质粒作为模板，扩增分别包含FXR1P N-端结构域、KH结构域的编码区序列，连接到用于酵母三杂交文库筛选的pYESTrp3质粒，得到诱饵质粒，导人大肠杆菌Top10扩增，筛选阳性克隆并提取其中的重组质粒，再转化酵母菌L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2。结果经过测序验证，该重组诱饵质粒构建成功，转化酵母菌之后对宿主菌无毒性，无自激活现象。结论成功构建了能用于酵母三杂交文库筛选的FXR1P蛋白N-端结构域、KH结构域酵母三杂交诱饵载体，为研究这两个结构域的RNA结合功能奠定了基础。
[关键词]FXR1P；KH结构域；FXR1P N-端结构域；酵母三杂交；脆性X综合征
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