人血浆中全反式维甲酸、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸浓度的监测(2)
1.4.3 样本处理 精密吸取血浆样品1 ml,置10 ml具塞离心试管中,加入内标溶液25 μl,旋涡混合30 s。加入无水乙醇1 ml,漩涡混合30 s,再依次加入2 mol/L醋酸溶液100 μl、水500 μl,漩涡混合10 s。加入正己烷3 ml,旋涡混合1 min,4 500 r/min离心5 min。转移上层液至尖底试管中,氮气流吹干。残渣加入甲醇100 μl 旋涡混合30 s使溶解,10 000 r/min离心5 min,取上清液20 μl进样,记录色谱图,以ATRA、13-CRA、9-CRA峰面积(As)与内标峰面积(Ai)之比Y代入标准曲线计算ATRA、13-CRA与9-CRA血药浓度。
1.4.4 标准曲线 精密量取空白血浆1 ml,置10 ml具塞离心管中,分别加入不同浓度混合标准溶液20 μl,混匀,使ATRA、13-CRA与9-CRA血药浓度相当于1、5、10、20、50、100、200 ng/ml ......
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