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编号:11527200
人白介素24基因重组腺病毒载体的构建与鉴定(2)
http://www.100md.com 2008年2月24日 《中国实用医药》 2007年第33期
人白介素24基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

     1.2.5重组腺病毒AdIL-24转染293A细胞后RT-PCR鉴定取感染腺病毒2 d后的293A细胞,离心收集细胞,PBS洗涤3次后按试剂盒说明提取细胞的总RNA,经逆转录为cDNA,分别以上游5′-CAGATCTGGTGGATTAAAGTGCCCAGC-3′,下游5′-CCTCGAGGGTCACCATCAGCAAGGTCAG-3′作为IL-24的上下游引物,进行PCR反应。以GAPDH作为内参照,上游5′-CCCATCACCATCTTCCAG-3′,下游5′-CCTGCTTCACCACCTTCT-3′,扩增长度为577bp。反应条件:95℃预变性3min,再95℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸4 min(共30个循环),72℃继续延伸12 min。同时取未转染重组腺病毒的293A细胞作为对照。

    1.2.6 重组腺病毒AdIL-24的纯化及病毒滴度测定将生长状况良好的293A细胞,用胰酶消化后,细胞计数,稀释细胞浓度约为105个/ml后,在96孔板上按每孔100ul接种细胞,培养24 h后,将收获的重组病毒子按10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9稀释后,每个稀释度按每孔100 μl接种1排 ......
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