HPLC法测定复方石韦颗粒中苦参碱的含量
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【摘要】目的建立HPLC法测定苦参碱含量的方法。方法以反相高效液相法测定苦参碱的含量。色谱柱：HanbonLichrospher(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%三氟醋酸(5:95)；检测波长：205 nm；结果苦参碱在0.2～1.0 μg浓度范围内线性关系良好；(r＝0.999 8，n=5)平均加样回收率为100.02%，RSD为1.24%。结论该方法快速，简便，准确，重复性好。
【关键词】复方石韦颗粒;苦参碱;HPLC法
复方石韦颗粒是《卫生部药品标准中药成方制剂第十五册》收载的片剂剂改品种。由石韦、黄芪、苦参、萹蓄四味药组成。复方石韦颗粒具有清热燥湿，利尿通淋。用于小便不利，尿频，尿急，尿痛，下肢浮肿等症。也可用于急慢性肾小球肾炎，肾盂肾炎，膀胱炎，尿道炎[1-2]。苦参碱为其主要成分，因此把苦参碱的含量作为复方石韦颗粒的质控标准。
1仪器与试药
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1.1仪器与试药美国Waters-515型高效液相色谱仪；色谱柱：HanbonLichrospher (250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测器：Waters-2487紫外检测器；Empower色谱工作站。
1.2苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所编号 110805-200306)；复方石韦颗粒(厂家提供)；乙腈均为色谱纯(默克公司)，其余试剂均为分析纯。
2实验方法与结果
2.1色谱条件的选择色谱柱：HanbonLichrospher(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%三氟醋酸(5:95)；检测波长：205 nm；流速：1.0 ml/min；进样体积：10 μL；柱温：35℃。该条件下苦参碱与其他组分均能达到基线分离，阴性对照样品在苦参碱色谱峰的保留时间处无干扰，结果见图1。
, http://www.100md.com 2.2对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品10.04 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取50 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(含苦参碱50.2 μg/ml)。
2.3供试品溶液的制备取本品，研细，取约1 g，精密称定，加浓氨试液1 ml使浸润，再精密加氯仿25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4检测波长的选择取苦参碱对照品的甲醇溶液，置紫外分光光度计中，在190～350 nm的波长范围内进行光谱扫描，结果苦参碱在205 nm的波长处有最大吸收，故将本品的检测波长定为205 nm。
2.5线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μl进样，记录色谱峰面积，以苦参碱浓精密吸取浓度为100.4 μg/ml的苦参碱对照品溶液2、4、6、8、10 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 μl进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A＝562 878×C-4 448，r＝0.999 8。
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结果表明苦参碱在0.2～1.0 μg范围内具有良好的线性关系。
2.6精密度试验精密吸取同一份供试品溶液(批号20030524)10 μl，重复进样5次，测定其峰面积积分值，RSD为0.21%。结果表明：本方法精密度良好。
2.7重现性试验取同一批号样品(批号20030524)5份，按上述条件依法平行处理并测定含量(n=2)，测定其峰面积积分值，RSD为1.43%。结果表明：本方法重现性好。
2.8稳定性试验分别精密吸取同一份供试品溶液(批号20030524)10 μl，于0、3、6、9、12 h进样，测定其峰面积积分值，RSD为0.37%。结果表明，供试品溶液在12 h内峰面积值基本稳定。
2.9回收率试验精密称取已知含量为1.6093mg/g (批号20030524)样品0.5 g，共5份，分别精密加入苦参碱对照品溶液(50.20μg/mL)15 ml，即0.753 mg，挥去甲醇，再按上述含量测定项下的方法测定含量，结果见表1。
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取苦参药材细粉约2 g，照供试品溶液制备法依法测定，3批苦参药材中的苦参碱含量测定结果见表3，为保证产品的质量，规定投料药材苦参中苦参碱的含量应不得少于0.080%。
3讨论
3.1本品药味较多，成分复杂，本文对HPLC分析时的流动相系统组成和比例作了比较，对多种溶剂系统进行选择，采用乙腈-二乙胺，乙腈-0.1%三氟醋酸溶液等系统比较，根据分离情况，选用乙腈-三氟醋酸溶液(5：95)测定苦参碱含量，可使峰形变窄，提高分离度[3]。
3.2考察提取工艺时，采用超声提取法，考察了甲醇、70%乙醇、2%醋酸水溶液和氯仿的提取效率，结果表明：氯仿对苦参碱的提取效率最高，又考察了氯仿超声和浸渍提取方法，研究表明:超声和浸提效果相当，在此基础上，考察了足够量的氯仿超声提取20、30、40 min的含量差异，结果表明:超声提取30 min，苦参碱已基本提取完全[4-5]。
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3.3选择定容溶剂时，比较了以甲醇，流动相和水为定容溶剂的谱图，结果表明:以水为定容溶剂杂质干扰少，系统适应性强，样品无需氧化铝。
3.4本文采用反相高效液相色谱法测定复方石韦颗粒中苦参碱的含量，被测组分的分离较好，其他成分无干扰，而且结果准确，重现性较好，可作为实际生产中质量控制的方法[6]。
参考文献
1中华人民共和国药典(2000年版一部).中华人民共和国卫生部药典委员会编.人民卫生出版社，2000.中成药中的药材薄层色谱鉴别.吕武清.人民卫生出版社，1997.
2吴金英，孙建宁.复方石韦片的主要药效学试验研究.中成药2000，22(6)：428.
3中成药质量标准与标准物质研究.王宝琴.中国医药科技出版社，1994.
4常用中草药有效成份含量测定.陈发奎.人民卫生出版社，1997.
5吕武清.中成药中的药材薄层色谱鉴别.人民卫生出版社，1997.
6江苏新医学院.中药大辞典.上海科学技术出版社., 百拇医药(吕亚玲)