免疫学指标对自身免疫性肝病的诊断意义
【关键词】原发性胆汁性肝硬化；自身免疫性肝炎；原发性硬化性胆管炎；自身抗体
自身免疫性肝脏疾病主要包括原发性胆汁性肝硬化 (primary biliary cirrhosis，PBC)、自身免疫性肝炎 (autoimmune hepatitis，AIH)、原发性硬化性胆管炎 (primary sclerotic cholangitis，PSC))，以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。虽然它们均属自身免疫性肝病，但病因、临床表现、及治疗各不相同，而早期诊断和早期治疗又是控制疾病进展的关键，故诊断及鉴别诊断成为临床急需解决的问题。其中实验室检察特别是免疫指标的测定有着重要的作用。
1 资料与方法
1.1 研究对象 2000年1月至2006年12月在我院门诊及住院的肝病患者200例，其中：①原发性胆汁性肝硬化(PBC)52例,男9例，女43例，年龄14～69岁;②自身免疫性肝炎(AIH)41例，男15例，女26例，年龄17～51岁;③原发性硬化性胆管炎(PSC)18例，男13例，女5例，年龄37～51岁;④对照组慢性乙型肝炎(HBV)患者89例，男58例，女31例，年龄23～71岁。
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1.2 诊断标准 PBC的诊断以2000年美国肝病学会(AASLD)指导建议为准，AIH以布来顿(IASL，1998)标准进行记分诊断，PSC的诊断参照Mayer标准。
1.3 试剂和方法
1.3.1 标本的采集 所采的被检标本均为空腹不抗凝血2～3 ml，以2 500 r/min速度离心15 min分离血清。
1.3.2 抗核抗体(Anti-nuclear antibodies，ANA)、抗平滑肌抗体(Smooth muscle antibodies，SMA)、抗线粒体抗体(anti-mitocondrial antibodies，AMA)、抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutropil cytoplasmic antibodies，ANCA)等自身抗体的试剂盒由德国欧蒙公司生产，采用间接免疫荧光法(IIF)检测，血清稀释度>1∶100时组织或细胞内出现特异性荧光判为阳性。
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1.3.3 抗线粒体Ⅱ型(AMA-M2) 、抗体抗肝肾微粒体抗体(anti-liver/kidney microsomal antibodies，LKM)、抗可溶性肝抗原(anti-soluble liver antigen antibodies,SLA) 采用免疫印迹法检测。
1.3.4 应用德国BNⅡ免疫速率散射比浊仪检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,操作方法严格按试剂说明及南昌大学第二附属医院检验科SOP标准文件进行操作。
1.3.5 统计分析 数据分析均采用SPSS 11.5软件进行统计分析，计数资料行χ2检验,计量资料行t检验。
2 结果
2.1 三组自身免疫性肝病与乙肝对照组自身抗体结果比较，PBC组以AMA、AMA-M2阳性率最高，和其他三组比较结果差异有统计学意义(P
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2.2 自身免疫性肝病组与对照组的免疫球蛋白的含量比较结果显示IgM在PBC患者中升高最多(P0.05)结果见表2。
3 讨论
自身免疫性肝病是一组在体内免疫功能异常的基础上发生的炎症性肝胆疾病，主要包括PBC、AIH、PSC以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。
PBC是一种可能与自身免疫有关的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，主要发生于中年女性，病理学表现为非脓性肝内胆管慢性炎症阻塞和汇管区淋巴细胞浸润，从而导致胆汁淤积，发生肝纤维化及肝硬化。本组患者的自身抗体以AMA、AMA-M2阳性率最高，分别达到了88.5%和84.6%，与其他三组比较差异有统计学意义(P[1]。目前为止，发现线粒体膜上存在9种自身抗原(M1～9)，有人认为M2伴M4、M8阳性多见于PBC的严重类型，M2伴M9阳性多见于PBC轻型患者以及PBC患者的亲属；M4、M7、M8阳性与自身免疫性肝炎有关[2]。本组AMA阳性血清中只有2例未检测到AMA-M2抗体，说明与PBC关系最大的是M2。其次为ANA阳性率为57.7%(30/52)，是诊断PBC的另一重要抗体，尤其AMA阴性时可作为其诊断的一个重要指标 。ANA与疾病严重性相关，可成为判断预后的指标，尤其是核多点型抗体阳性与肝功能异常明显相关，预后更差。但它特异性不高，不能做为鉴别诊断指标。IgM 含量在本组患者中显著升高(P[3]。LKM-1抗体阳性的AIH患者往往临床表现较重，并且伴IgA缺陷[4]，但本组患者IgA并无明显下降，可能与LKM-1抗体阳性率不是很高有关。本组患者IgG升高明显，与对照组相比(P0.05)。抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶，是构成AIH患者识别线性抗原的决定簇，因与HCV病毒基因序列有部分同源性，所以约在7%慢性丙型肝炎患者血清中出现[5]。SLA抗体在本组中的阳性率虽然不高只有9.8%，但它对AIH特异性较高，可出现在LKM-1阴性的AIH患者血清中，而且在病毒性肝炎患者血清中呈阴性反应，可视为AIH新的血清学指标。
PSC是一种病因不明的慢性肝内胆汁淤积综合征，常见于中青年男性，与PBC及AIH相比PSC无免疫学特征，有研究者发现抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)与之有密切相关，70% 以上的患者会出现血浆抗中性粒细胞抗体 (pANCA)[6]，但本组ANCA的阳性率较低只有44.4%，可能由于例数较少，有待于积累患者进一步观察。本研究中ANCA结果和其他三组比较差异有统计学意义(P, 百拇医药(刘 宁 谭立明 李 华)
自身免疫性肝脏疾病主要包括原发性胆汁性肝硬化 (primary biliary cirrhosis，PBC)、自身免疫性肝炎 (autoimmune hepatitis，AIH)、原发性硬化性胆管炎 (primary sclerotic cholangitis，PSC))，以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。虽然它们均属自身免疫性肝病，但病因、临床表现、及治疗各不相同，而早期诊断和早期治疗又是控制疾病进展的关键，故诊断及鉴别诊断成为临床急需解决的问题。其中实验室检察特别是免疫指标的测定有着重要的作用。
1 资料与方法
1.1 研究对象 2000年1月至2006年12月在我院门诊及住院的肝病患者200例，其中：①原发性胆汁性肝硬化(PBC)52例,男9例，女43例，年龄14～69岁;②自身免疫性肝炎(AIH)41例，男15例，女26例，年龄17～51岁;③原发性硬化性胆管炎(PSC)18例，男13例，女5例，年龄37～51岁;④对照组慢性乙型肝炎(HBV)患者89例，男58例，女31例，年龄23～71岁。
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1.2 诊断标准 PBC的诊断以2000年美国肝病学会(AASLD)指导建议为准，AIH以布来顿(IASL，1998)标准进行记分诊断，PSC的诊断参照Mayer标准。
1.3 试剂和方法
1.3.1 标本的采集 所采的被检标本均为空腹不抗凝血2～3 ml，以2 500 r/min速度离心15 min分离血清。
1.3.2 抗核抗体(Anti-nuclear antibodies，ANA)、抗平滑肌抗体(Smooth muscle antibodies，SMA)、抗线粒体抗体(anti-mitocondrial antibodies，AMA)、抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutropil cytoplasmic antibodies，ANCA)等自身抗体的试剂盒由德国欧蒙公司生产，采用间接免疫荧光法(IIF)检测，血清稀释度>1∶100时组织或细胞内出现特异性荧光判为阳性。
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1.3.3 抗线粒体Ⅱ型(AMA-M2) 、抗体抗肝肾微粒体抗体(anti-liver/kidney microsomal antibodies，LKM)、抗可溶性肝抗原(anti-soluble liver antigen antibodies,SLA) 采用免疫印迹法检测。
1.3.4 应用德国BNⅡ免疫速率散射比浊仪检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM,操作方法严格按试剂说明及南昌大学第二附属医院检验科SOP标准文件进行操作。
1.3.5 统计分析 数据分析均采用SPSS 11.5软件进行统计分析，计数资料行χ2检验,计量资料行t检验。
2 结果
2.1 三组自身免疫性肝病与乙肝对照组自身抗体结果比较，PBC组以AMA、AMA-M2阳性率最高，和其他三组比较结果差异有统计学意义(P
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2.2 自身免疫性肝病组与对照组的免疫球蛋白的含量比较结果显示IgM在PBC患者中升高最多(P0.05)结果见表2。
3 讨论
自身免疫性肝病是一组在体内免疫功能异常的基础上发生的炎症性肝胆疾病，主要包括PBC、AIH、PSC以及这三种疾病中任何两者之间的重叠综合征。
PBC是一种可能与自身免疫有关的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，主要发生于中年女性，病理学表现为非脓性肝内胆管慢性炎症阻塞和汇管区淋巴细胞浸润，从而导致胆汁淤积，发生肝纤维化及肝硬化。本组患者的自身抗体以AMA、AMA-M2阳性率最高，分别达到了88.5%和84.6%，与其他三组比较差异有统计学意义(P[1]。目前为止，发现线粒体膜上存在9种自身抗原(M1～9)，有人认为M2伴M4、M8阳性多见于PBC的严重类型，M2伴M9阳性多见于PBC轻型患者以及PBC患者的亲属；M4、M7、M8阳性与自身免疫性肝炎有关[2]。本组AMA阳性血清中只有2例未检测到AMA-M2抗体，说明与PBC关系最大的是M2。其次为ANA阳性率为57.7%(30/52)，是诊断PBC的另一重要抗体，尤其AMA阴性时可作为其诊断的一个重要指标 。ANA与疾病严重性相关，可成为判断预后的指标，尤其是核多点型抗体阳性与肝功能异常明显相关，预后更差。但它特异性不高，不能做为鉴别诊断指标。IgM 含量在本组患者中显著升高(P[3]。LKM-1抗体阳性的AIH患者往往临床表现较重，并且伴IgA缺陷[4]，但本组患者IgA并无明显下降，可能与LKM-1抗体阳性率不是很高有关。本组患者IgG升高明显，与对照组相比(P0.05)。抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶，是构成AIH患者识别线性抗原的决定簇，因与HCV病毒基因序列有部分同源性，所以约在7%慢性丙型肝炎患者血清中出现[5]。SLA抗体在本组中的阳性率虽然不高只有9.8%，但它对AIH特异性较高，可出现在LKM-1阴性的AIH患者血清中，而且在病毒性肝炎患者血清中呈阴性反应，可视为AIH新的血清学指标。
PSC是一种病因不明的慢性肝内胆汁淤积综合征，常见于中青年男性，与PBC及AIH相比PSC无免疫学特征，有研究者发现抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)与之有密切相关，70% 以上的患者会出现血浆抗中性粒细胞抗体 (pANCA)[6]，但本组ANCA的阳性率较低只有44.4%，可能由于例数较少，有待于积累患者进一步观察。本研究中ANCA结果和其他三组比较差异有统计学意义(P, 百拇医药(刘 宁 谭立明 李 华)