肝损伤血清体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞(2)
2.4 免疫细胞化学检测AFP和ALB的表达 分别于诱导后0、7、14、21 d行免疫细胞化学检测。取出细胞爬片后PBS洗3次, 3 min/次;冷丙酮固定10 min;PBS洗3次,3 min/次;3%H2O2作用20 min;PBS洗3次,3 min/次;10%山羊血清封闭30 min;甩去封闭液,滴加AFP(1∶800)和ALB(1∶3 000)一抗,孵育2 h;PBS洗3次,3 min/次;滴加抗兔生物素化二抗,孵育30 min; PBS洗3次,3 min/次;滴加HRP标记链亲和素孵育30 min;PBS洗3次,3 min/次;二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染,酸酒精分化,胞浆内有棕黄色颗粒为阳性。同时用PBS 代替一抗作空白对照。
2.5 PAS法检测细胞合成糖原的功能 分别于诱导后0、7、14、21 d行糖原染色检测。取出细胞爬片后PBS洗2次, 2 min/次; 95%酒精固定10 min;蒸馏水浸洗2次,1 min/次;高碘酸水作用10 min;蒸馏水冲洗,schiff液作用15 min,倾去;偏重亚硫酸钠作用2次,1 min/次;流水冲洗5 min;酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片;显微镜下观察结果 ......
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