矽肺患者细胞免疫水平及肺功能的相关性研究(1)
【摘要】 目的 通过对矽肺患者及健康对照者的细胞免疫水平和肺功能进行检测，观察矽肺患者不同期别的细胞免疫水平及肺功能状态，并将他们的细胞免疫水平及肺功能进行相关性分析。方法 应用流式细胞仪检测50例矽肺患者和30例健康人群的外周血中CD4、CD8 及CD4/CD8值并进行比较;检测50例矽肺患者肺功能,进行3个期别间比较并与外周血中CD4、CD8 及CD4/CD8值进行相关性分析。结果 矽肺组与健康组比较，外周血中CD4、CD8 及CD4/CD8值3组数据均差异有统计学意义(P4、CD8 及CD4/CD8值3组数据均差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ期矽肺组中第1秒用力呼气量(FEV1)占预计值的百分比和75%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V75%)均在正常范围，而Ⅱ期矽肺组和Ⅲ期矽肺组中FEV1%和V75%明显低于正常值范围，并且与Ⅰ期矽肺组比较差异有统计学意义(P0.05)。3组中50%肺活量时最大用呼气流速占预计值的百分比(V50%)和25%肺活量时最大用力呼气流速占预值的百分比(V25%)均低于正常范围，提示3组患者均存在小气道通气功能障碍，Ⅱ期矽肺组和Ⅲ期矽肺组以上数值明显低于Ⅰ期矽肺组，该差异有统计学意义(P0.05)。V50%和V25%与CD8细胞百分比呈显著负相关(P4细胞百分比和 CD4/CD8比值呈显著正相关(P8+淋巴细胞对矽肺患者可能具有加重小气道通气功能障碍的作用。
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【关键词】矽肺；T淋巴细胞亚群；CD8T淋巴细胞；肺功能
矽肺是我国目前危害严重、发病率极高的职业病，近年来发病率有明显增加的趋势[1]。矽肺是由于长期吸入游离二氧化硅粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的全身性疾病。其常见的并发症为肺结核，据国内职业病流行病学调查统计，矽肺合并肺结核的平均合并率分别为：Ⅰ期矽肺为20%，Ⅱ期矽肺为30%，Ⅲ期矽肺为50%。两病合并存在,相互影响,相互促进，加快病变进展，易继发肺气肿、肺心病，严重损害患者的肺功能。机体对结核的免疫作用是由细胞免疫完成的，体液免疫作用有限[2]，据此推测矽肺患者易并发肺结核的原
因可能与细胞免疫水平变化密切相关。同时矽肺患者肺功能的损害不仅表现为限制性通气功能障碍还存在阻塞性通气功能障碍。近年的研究提示，在慢性阻塞性肺病患者中，外周气道中CD8细胞数量明显增加，且与气流受限存在一定相关性[3，4]。但CD8细胞是否与矽肺患者的肺功能之间具有相关性，目前国内外尚无报道。本实验是通过对矽肺患者及健康对照者的细胞免疫水平和肺功能进行检测，观察矽肺患者不同期别的细胞免疫水平及肺功能状态，并将其进行相关性分析。
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1 材料与方法
1.1 研究对象 健康组：选取无粉尘及其他毒物接触史，在沈阳市职业病院体检正常的企事业单位退休人员30名，年龄60~75岁；矽肺组：选取在沈阳市职业病院目前收治的矽肺患者50例，年龄60~75岁，按照国家制定的《尘肺病诊断标准(GBZ70-2002)》由沈阳市职业病诊断组确诊为矽肺，其中Ⅰ期矽肺30例、Ⅱ期矽肺12例、Ⅲ期矽肺8例。
1.2 药品及试剂 TRITEST试剂、免洗溶血素均由美国BECTON DICKINSON公司提供。
1.3 实验仪器 美国BECTON DICKINSON公司的流式细胞仪(FACSCALIBUR)，由中国医科大学附属第一医院中心实验室提供;意大利MIR-SPIROLOB2肺功能仪，由沈阳市第九人民医院提供。
2 实验方法
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2.1 研究对象分组 按照以上研究对象共分四组。健康组：60~75岁的健康体检者30名；Ⅰ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅰ期矽肺患者35例；Ⅱ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅱ期矽肺患者12例；Ⅲ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅲ期矽肺患者8例。矽肺分期诊断标准均按照国家制定的《尘肺病诊断标准(GBZ70-2002)》。
2.2 临床资料的检测 ①外周血T淋巴细胞亚群的测定：采集实验者静脉血2 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，防振荡，采血后立即送检，提取淋巴细胞，将每份淋巴细胞悬液分入3支试管，应用三色荧光标记单克隆抗体CD4、CD8、工作液各20 μl,分别加入上述三支用试管中,在室温下避光反应20 min后，用美国BECTON DICKINSON公司的流式细胞仪(FACSCALIBUR)进行检测。用FACSMULTISET软件进行自动分析;②肺功能测定：用意大利MIR-SPIROLOB2肺功能仪测定所有研究对象肺功能，检测项目为：第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占预计值的百分比(FEV1%)、用力肺活量(FVC)、75%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V75%)、50%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V50%)、25%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V25%)。各指标重复测定2~3次,取其最大值。
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2.3 主要观察指标 ①矽肺组与健康组外周血T淋巴细胞亚群比较;②矽肺组间外周血T淋巴细胞亚群比较;②各组矽肺患者肺功能比较;④矽肺患者外周血T淋巴细胞亚群与肺功能的相关性。
2.4 统计学分析 计量数据用均值±标准差(x±s)表示，两组间均数比较，组间差异比较采用t检验，用统计软件SPSS13.0分析处理，相关性处理采用直线相关分析。
3 实验结果
3.1 矽肺患者与健康组人群外周血CD4、CD8 及CD4/CD8均值的比较
将Ⅰ期矽肺组(30例)、Ⅱ期矽肺组(12例)和Ⅲ期矽肺组(8例)共计50例与正常组30名进行比较。矽肺组的CD4百分数较健康组明显下降，CD8百分数较健康组明显上升，CD4/CD8比值较健康组明显下降，以上3组数据比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。, http://www.100md.com(杨 阳 张晓晔)
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【关键词】矽肺；T淋巴细胞亚群；CD8T淋巴细胞；肺功能
矽肺是我国目前危害严重、发病率极高的职业病，近年来发病率有明显增加的趋势[1]。矽肺是由于长期吸入游离二氧化硅粉尘所致的以肺部弥漫性纤维化为主的全身性疾病。其常见的并发症为肺结核，据国内职业病流行病学调查统计，矽肺合并肺结核的平均合并率分别为：Ⅰ期矽肺为20%，Ⅱ期矽肺为30%，Ⅲ期矽肺为50%。两病合并存在,相互影响,相互促进，加快病变进展，易继发肺气肿、肺心病，严重损害患者的肺功能。机体对结核的免疫作用是由细胞免疫完成的，体液免疫作用有限[2]，据此推测矽肺患者易并发肺结核的原
因可能与细胞免疫水平变化密切相关。同时矽肺患者肺功能的损害不仅表现为限制性通气功能障碍还存在阻塞性通气功能障碍。近年的研究提示，在慢性阻塞性肺病患者中，外周气道中CD8细胞数量明显增加，且与气流受限存在一定相关性[3，4]。但CD8细胞是否与矽肺患者的肺功能之间具有相关性，目前国内外尚无报道。本实验是通过对矽肺患者及健康对照者的细胞免疫水平和肺功能进行检测，观察矽肺患者不同期别的细胞免疫水平及肺功能状态，并将其进行相关性分析。
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1 材料与方法
1.1 研究对象 健康组：选取无粉尘及其他毒物接触史，在沈阳市职业病院体检正常的企事业单位退休人员30名，年龄60~75岁；矽肺组：选取在沈阳市职业病院目前收治的矽肺患者50例，年龄60~75岁，按照国家制定的《尘肺病诊断标准(GBZ70-2002)》由沈阳市职业病诊断组确诊为矽肺，其中Ⅰ期矽肺30例、Ⅱ期矽肺12例、Ⅲ期矽肺8例。
1.2 药品及试剂 TRITEST试剂、免洗溶血素均由美国BECTON DICKINSON公司提供。
1.3 实验仪器 美国BECTON DICKINSON公司的流式细胞仪(FACSCALIBUR)，由中国医科大学附属第一医院中心实验室提供;意大利MIR-SPIROLOB2肺功能仪，由沈阳市第九人民医院提供。
2 实验方法
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2.1 研究对象分组 按照以上研究对象共分四组。健康组：60~75岁的健康体检者30名；Ⅰ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅰ期矽肺患者35例；Ⅱ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅱ期矽肺患者12例；Ⅲ期矽肺组：60~75岁正在住院的Ⅲ期矽肺患者8例。矽肺分期诊断标准均按照国家制定的《尘肺病诊断标准(GBZ70-2002)》。
2.2 临床资料的检测 ①外周血T淋巴细胞亚群的测定：采集实验者静脉血2 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，防振荡，采血后立即送检，提取淋巴细胞，将每份淋巴细胞悬液分入3支试管，应用三色荧光标记单克隆抗体CD4、CD8、工作液各20 μl,分别加入上述三支用试管中,在室温下避光反应20 min后，用美国BECTON DICKINSON公司的流式细胞仪(FACSCALIBUR)进行检测。用FACSMULTISET软件进行自动分析;②肺功能测定：用意大利MIR-SPIROLOB2肺功能仪测定所有研究对象肺功能，检测项目为：第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占预计值的百分比(FEV1%)、用力肺活量(FVC)、75%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V75%)、50%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V50%)、25%肺活量时最大用力呼气流速占预计值的百分比(V25%)。各指标重复测定2~3次,取其最大值。
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2.3 主要观察指标 ①矽肺组与健康组外周血T淋巴细胞亚群比较;②矽肺组间外周血T淋巴细胞亚群比较;②各组矽肺患者肺功能比较;④矽肺患者外周血T淋巴细胞亚群与肺功能的相关性。
2.4 统计学分析 计量数据用均值±标准差(x±s)表示，两组间均数比较，组间差异比较采用t检验，用统计软件SPSS13.0分析处理，相关性处理采用直线相关分析。
3 实验结果
3.1 矽肺患者与健康组人群外周血CD4、CD8 及CD4/CD8均值的比较
将Ⅰ期矽肺组(30例)、Ⅱ期矽肺组(12例)和Ⅲ期矽肺组(8例)共计50例与正常组30名进行比较。矽肺组的CD4百分数较健康组明显下降，CD8百分数较健康组明显上升，CD4/CD8比值较健康组明显下降，以上3组数据比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。, http://www.100md.com(杨 阳 张晓晔)