免疫金银染色法检测SLE患者血清ANA和抗-dsDNA抗体(2)
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1.3.6 胶体金与羊抗人IgG的结合 将胶体金和羊抗人IgG溶液分别以0.1 mol/L K2CO3调pH至9.0，电磁搅拌羊抗人IgG溶液，加入胶体金溶液，继续搅拌10 min，加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。我们加入5%BSA作为稳定剂使溶液终浓度为1%。
1.3.7 胶体金标记蛋白的纯化 采用超速离心法：先低速离心1 800 r/min，20 min，弃去凝聚的沉淀。然后将5 nm胶体金结合物用6 000 g，4℃离心1 h；仔细吸出上清，沉淀物用含1%BSA的PBS液(含0.02%NaN3)，将沉淀重悬为原体积的1/10，4℃保存。在结合物内加50%三酰甘油可贮存于.70℃保存1年以上。
1.3.8 胶体金蛋白结合物的质量鉴定 胶体金颗粒在波长510~550 nm之间出现最大吸收值峰。用0.02 mol/L pH8.2 PBS液(含1%BSA，0.02%NaN3)将胶体金蛋白试剂作1∶20稀释，OD520＝0.26,符合要求。(一般应用液的OD520应为0.2~0.4)。
1.4 银染液配制 采用本实验室[4]配方液,A液:0.22%乙酸银溶液。B液:50%阿拉伯树胶,去离子水溶解,每天摇动,5 d后取滤液使用;C液:1%对苯二酚溶液,500 mg对苯二酚溶于30 ml 0.05 mol/L pH3.8柠檬酸盐缓冲液中。D液:在C液中加入10~40 ml B液。银染液:将A液和D液等量混合即成(临用前配)。
1.5 稀释液及洗液 pH7.2,0.01 mol/L PBS.Tween20缓冲液。
1.6 检测流程 稀释 用稀释液稀释血清。
加样：将加样板放在泡沫板上，按顺序分别滴加25 μl稀释后的血清至加样板的反应区中，避免产生气泡。滴加完所有待测标本后才开始温育 ......
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