长效干扰素-α的抗病毒性肝炎研究进展(2)
2 白蛋白融合干扰素
将干扰素与人血清白蛋白(Human serum albumin， HSA)融合是长效干扰素的另一个发展方向。HSA是分子量为66.5kD 的非糖基化蛋白，对维持体内渗透压和血浆体积起着至关重要的作用。其肾清除率非常低,体内半衰期为14~20 d。HSA是体内因子和药物转运的天然载体，可作为提高小分子蛋白在血液中的半衰期的载体。白蛋白融合干扰素(HSA.IFN)就是通过生物工程技术，构建编码HSA和IFN的融合基因并在载体中获得高效表达而成。
2.1 HSA.IFN的药动学研究 Osborn BL等通过克鲁维氏酵母表达的HSA.IFNα，在猕猴体内的半衰期(皮下注射)比IFNα延长了18 倍[18.19]。通过毕赤酵母也能高效表达HSA.IFNα.2b融合蛋白[20][21],静脉注射到猕猴体内后，药物血浆半衰期达101 h， 约为普通IFNα.2b 的20 倍，PEG化干扰素的1.5~2 倍。
, 百拇医药
2.2 HSA.IFN的药效学研究 HSA.IFN的药效学研究主要集中在抗HCV作用：通过体外生物学鉴定法比较猴血清的抗病毒活性，皮下注射HSA.IFNα后的猴血清抗EMCV活性和持续时间要明显强于注射IFN-α后的猴血清[18]。Liu C等[22]通过体外细胞模型Huh7研究发现，Alb.IFNα.2b在肝细胞和肝外细胞均可明显抑制HCV的复制，其抗病毒作用甚至比PEG.IFNα.2a更强；临床试验表明[23.24]，HSA.IFN半衰期达140 h以上，给药间隔时间为2~4周；对HCV.RNA的抑制率达69%,并且表现为剂量依赖性。在欧美国家，白蛋白融合干扰素已经入Ⅱ/Ⅲ期临床实验，Zeuzem S等[23]实验发现每两周给一次Alb.IFN，每次1 200 μg，其抗HCV作用最好，给药四周后HCV RNA就降低到限制量(LOQ)以下。其抗HCV机制与IFN相似，主要是通过诱导干扰素特异基因的表达，如MxA、OAS1、 IFI27、 IFI44表达增加，与IFN-α一致[18，24，25]。HSA.IFN是否以同样具有抗HBV作用，还有待近一步研究。
, 百拇医药
HSA.IFN有望代替常规干扰素用于丙型、乙型肝炎等的治疗。其注射频率可以从常规干扰素的每天1次或每周2次减少到每2周1次。对于疗程长达6~12 个月的病毒性肝炎等的治疗，这种注射频率的大幅度减少，将极大地方便患者。同时长效干扰素所提供的较为稳定的血药浓度也将提高疗效，减少不良反应。HSA.IFN不良反应较轻，常见有头疼、乏力、注射部位红斑、关节痛及发热等[26]，患者一般能够忍受。
3 干扰素脂质体
近年来用脂质体(Liposome,LP)包裹IFN形成干扰素脂质体(IFN.LP)也受到重视。脂质体是天然磷脂分子层膜结构微球体，本身无毒无免疫活性，应用相应的化学工艺用脂质体包封药物后，能延长药物作用时间、减少药物用量、增加药物稳定性等，并且还具有一定的靶向功能，可减少药物毒性。目前已有两性霉素B、阿霉素、柔红霉素B等化学药物脂质体产品已用于临床，蛋白类药物脂质体也进入临床试验阶段，如干扰素脂质体(IFN.LP)乳膏。
, 百拇医药
脂质体包封IFN后可使药物80%左右分布于肝、脾、淋巴结等网状内皮系统，从而提高肝内药物浓度[27]；脂质体包封药物后，可使药物免受体液中抗体的中和及核酸酶的降解，从而增加药物稳定性，延缓药物代谢，延长药物半衰期，提高血药浓度。动物实验表明，IFNa.2b脂质体的半衰期较IFNa.2b提高2~4倍,靶向性也明显增加[28]。然而，单纯的脂质体易被网状内皮系统摄取，特异性靶向性低；近几年发展起来的受体介导的脂质体技术解决了这一难题。杜施霖等[29]通过构建针对大鼠肝星状细胞受体介导的靶向脂质体，观察发现包裹IFN-α1b的长循环脂质体可保护IFN 不被血清酶降解，能有效地延长给药时间(1周)。虽然如此，IFN.LP仍然有一些缺陷有待解决，如包封率低、泄漏率高、粒径稳定性差、生物活性易丧失，这样也使得其工业化生产难成规模。只有当这些问题得到妥善解决后IFN.LP才可能走向临床。
4 结论和展望
, 百拇医药 IFN-α对病毒性肝炎的疗效肯定，可明显提高患者的生存质量，并降低患者经济负担[30]，仍不失为治疗乙肝的首选药物之一。但其半衰期短等缺点也严重束缚了其临床应用。随着长效干扰素的不断开发和应用，其优越性得到越来越多的体现，有逐渐取代普通干扰素的趋势。开发出长效、高效的干扰素也越来越成为病毒性肝炎治疗的重要发展方向。
参考文献
1 Zhang FK.Pegylated interferons in the treatment of chronic hepatitis C.Chinese Medical Journal，2003，116∶495.498.
2 Glue P，Fang JW，Rouzier.Panis R，et al.Pegylated interfeton.alpha 2b:pharmacokineyics pharmacodynalics，safety，and preliminary efficacy data，Hepatitis C Intervention Therapy Group.Clin Pharmacol Ther，2000，68(5):556.567.
, 百拇医药
3 Cooksley WG，Piratvisuth T，Lee SD,et al.Peginterferon alpha.2a(40 kDa):an advance in the treatment of hepatitis B eantigen.positive chronic hepatitisB.J Viral Hepat，2003,10:298.230.
4 Lau G， Priatvisuth T， Kang XL， et al.Peginterferon alfa.2a(40KD)(pegasys)monotherapy and incombination with lamivudine is more effective than lamivudine monotherapy in HBeAg.positive chronic hepatitis B:result s from a large，multinational study.Hepatology,2004，40(Suppl 1):171.
5 Janssen HLA， Senturk H， Zeuzem S， et al.Peginterferon alfa.2b and lamivudine combination therapy compared with peginterferon alfa.2b for chronic HBeAg positive hepatitis B:a randomized trial in 307 patients.Hepatology，2003，38:246., 百拇医药(康传贞 张 翠)
将干扰素与人血清白蛋白(Human serum albumin， HSA)融合是长效干扰素的另一个发展方向。HSA是分子量为66.5kD 的非糖基化蛋白，对维持体内渗透压和血浆体积起着至关重要的作用。其肾清除率非常低,体内半衰期为14~20 d。HSA是体内因子和药物转运的天然载体，可作为提高小分子蛋白在血液中的半衰期的载体。白蛋白融合干扰素(HSA.IFN)就是通过生物工程技术，构建编码HSA和IFN的融合基因并在载体中获得高效表达而成。
2.1 HSA.IFN的药动学研究 Osborn BL等通过克鲁维氏酵母表达的HSA.IFNα，在猕猴体内的半衰期(皮下注射)比IFNα延长了18 倍[18.19]。通过毕赤酵母也能高效表达HSA.IFNα.2b融合蛋白[20][21],静脉注射到猕猴体内后，药物血浆半衰期达101 h， 约为普通IFNα.2b 的20 倍，PEG化干扰素的1.5~2 倍。
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2.2 HSA.IFN的药效学研究 HSA.IFN的药效学研究主要集中在抗HCV作用：通过体外生物学鉴定法比较猴血清的抗病毒活性，皮下注射HSA.IFNα后的猴血清抗EMCV活性和持续时间要明显强于注射IFN-α后的猴血清[18]。Liu C等[22]通过体外细胞模型Huh7研究发现，Alb.IFNα.2b在肝细胞和肝外细胞均可明显抑制HCV的复制，其抗病毒作用甚至比PEG.IFNα.2a更强；临床试验表明[23.24]，HSA.IFN半衰期达140 h以上，给药间隔时间为2~4周；对HCV.RNA的抑制率达69%,并且表现为剂量依赖性。在欧美国家，白蛋白融合干扰素已经入Ⅱ/Ⅲ期临床实验，Zeuzem S等[23]实验发现每两周给一次Alb.IFN，每次1 200 μg，其抗HCV作用最好，给药四周后HCV RNA就降低到限制量(LOQ)以下。其抗HCV机制与IFN相似，主要是通过诱导干扰素特异基因的表达，如MxA、OAS1、 IFI27、 IFI44表达增加，与IFN-α一致[18，24，25]。HSA.IFN是否以同样具有抗HBV作用，还有待近一步研究。
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HSA.IFN有望代替常规干扰素用于丙型、乙型肝炎等的治疗。其注射频率可以从常规干扰素的每天1次或每周2次减少到每2周1次。对于疗程长达6~12 个月的病毒性肝炎等的治疗，这种注射频率的大幅度减少，将极大地方便患者。同时长效干扰素所提供的较为稳定的血药浓度也将提高疗效，减少不良反应。HSA.IFN不良反应较轻，常见有头疼、乏力、注射部位红斑、关节痛及发热等[26]，患者一般能够忍受。
3 干扰素脂质体
近年来用脂质体(Liposome,LP)包裹IFN形成干扰素脂质体(IFN.LP)也受到重视。脂质体是天然磷脂分子层膜结构微球体，本身无毒无免疫活性，应用相应的化学工艺用脂质体包封药物后，能延长药物作用时间、减少药物用量、增加药物稳定性等，并且还具有一定的靶向功能，可减少药物毒性。目前已有两性霉素B、阿霉素、柔红霉素B等化学药物脂质体产品已用于临床，蛋白类药物脂质体也进入临床试验阶段，如干扰素脂质体(IFN.LP)乳膏。
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脂质体包封IFN后可使药物80%左右分布于肝、脾、淋巴结等网状内皮系统，从而提高肝内药物浓度[27]；脂质体包封药物后，可使药物免受体液中抗体的中和及核酸酶的降解，从而增加药物稳定性，延缓药物代谢，延长药物半衰期，提高血药浓度。动物实验表明，IFNa.2b脂质体的半衰期较IFNa.2b提高2~4倍,靶向性也明显增加[28]。然而，单纯的脂质体易被网状内皮系统摄取，特异性靶向性低；近几年发展起来的受体介导的脂质体技术解决了这一难题。杜施霖等[29]通过构建针对大鼠肝星状细胞受体介导的靶向脂质体，观察发现包裹IFN-α1b的长循环脂质体可保护IFN 不被血清酶降解，能有效地延长给药时间(1周)。虽然如此，IFN.LP仍然有一些缺陷有待解决，如包封率低、泄漏率高、粒径稳定性差、生物活性易丧失，这样也使得其工业化生产难成规模。只有当这些问题得到妥善解决后IFN.LP才可能走向临床。
4 结论和展望
, 百拇医药 IFN-α对病毒性肝炎的疗效肯定，可明显提高患者的生存质量，并降低患者经济负担[30]，仍不失为治疗乙肝的首选药物之一。但其半衰期短等缺点也严重束缚了其临床应用。随着长效干扰素的不断开发和应用，其优越性得到越来越多的体现，有逐渐取代普通干扰素的趋势。开发出长效、高效的干扰素也越来越成为病毒性肝炎治疗的重要发展方向。
参考文献
1 Zhang FK.Pegylated interferons in the treatment of chronic hepatitis C.Chinese Medical Journal，2003，116∶495.498.
2 Glue P，Fang JW，Rouzier.Panis R，et al.Pegylated interfeton.alpha 2b:pharmacokineyics pharmacodynalics，safety，and preliminary efficacy data，Hepatitis C Intervention Therapy Group.Clin Pharmacol Ther，2000，68(5):556.567.
, 百拇医药
3 Cooksley WG，Piratvisuth T，Lee SD,et al.Peginterferon alpha.2a(40 kDa):an advance in the treatment of hepatitis B eantigen.positive chronic hepatitisB.J Viral Hepat，2003,10:298.230.
4 Lau G， Priatvisuth T， Kang XL， et al.Peginterferon alfa.2a(40KD)(pegasys)monotherapy and incombination with lamivudine is more effective than lamivudine monotherapy in HBeAg.positive chronic hepatitis B:result s from a large，multinational study.Hepatology,2004，40(Suppl 1):171.
5 Janssen HLA， Senturk H， Zeuzem S， et al.Peginterferon alfa.2b and lamivudine combination therapy compared with peginterferon alfa.2b for chronic HBeAg positive hepatitis B:a randomized trial in 307 patients.Hepatology，2003，38:246., 百拇医药(康传贞 张 翠)