凝血酶敏感蛋白-1对胆囊癌细胞生长增殖的作用(1)
【摘要】 目的 探讨研究凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对胆囊癌细胞株GBC-SD生长增殖的作用及其作用途径。方法 根据处理因素将胆囊癌细胞分为：空白对照组，TSP-1组，CD36单抗阻断组、CD47单抗阻断组。用四唑盐比色法(MTT)和流式细胞术检测TSP-1及受体CD36、CD47对胆囊癌细胞生长、细胞周期的影响。结果 TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长明显低于对照组(抑制率分别为：23.63%，9.57%，18.13%)。CD36阻断组的抑制率小于CD47阻断组。TSP-1组G0/G1期细胞数增加，S期和G2/M期细胞数减少，与对照组和CD36阻断组相比有显著性差异。增殖指数分别为：对照组(39.55±2.12)、TSP-1组(26.21±0.61)、CD36阻断组(36.43±1.28)、CD47阻断组(30.73±0.38)；各组之间两两比较均有差异。结论 TSP-1可对抑制胆囊癌细胞的生长，通过与受体CD36的结合阻滞胆囊癌细胞停止于G0/G1期可能是主要的作用途径。
, http://www.100md.com 【关键词】胆囊癌;凝血酶敏感蛋白-1；细胞周期，生长，增殖
The influence of TSP-1 on growth of gallbladder carcinoma cell
XUE Jian-feng,FAN Zheng-jun,ZHAO Shou-kui,et al.Department of Surgery,First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China
【Abstract】 Objective To explored the role and the mechanism of TSP-1 on the growth and cell cycle of of gallbladder carcinoma cellline GBC-SD.Methods The cell line was divided into 4 groups：control group,TSP-1 group,CD36-blocked group,CD47-blocked group.To detect the role of TSP-1,CD36,CD47 on cell growth by MTT test,on cell cycle by Flow cytometry.Results The growth of GBC-SD in other group were significantly slower than in control group,inhibitory rate was respectively 23.63%，9.57%，18.13%.Inhibitory effect of growth in CD36-blocked group was lower than in CD47-blocked group.Flow cytometry indicated that the cell number in G0/G1 phase in TSP-1 group increased than that in control group and CD36-blocked group,the cell number in S and G2/M phase in TSP-1 group reduced than in control group.The proliferation index was respectively：(39.55±2.12)(control group)、(26.21±0.61)(TSP-1 group)、(36.43±1.28)(CD36-blocked group)、(30.73±0.38)(CD47-blocked group)，the difference among groups were significantly.Conclusion TSP-1 can inhibit the growth of HCCLM3 cell through combining with the receptor CD36.
, 百拇医药
【Key words】Gallbladder carcinoma；Thrombospondin-1,cell cycle；Growth;Proliferation
胆囊癌的发病率近年来有增加的趋势，发现时已多属中晚期，手术切除率低，生长快，恶性程度高[1]，胆囊癌的生长增殖是在体内各种生长因子下共同作用的结果。凝血酶敏感蛋白-1(Thrombospondin-1，TSP-1)是一多功能糖蛋白，对调节肿瘤细胞的生长、粘附、迁移等生物学行为发挥重要作用 [2]。但是TSP-1对胆囊癌的作用尚未见报道，因此研究TSP-1对胆囊癌的生长增殖影响和可能的作用机制具有重要作用。
1 材料与方法
1.1 材料 胆囊癌细胞系GBC-SD购自于中科院上海细胞所；TSP-1蛋白、CD47单抗、CD36单抗、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自于Sigma公司。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 胆囊癌细胞系GBC-SD在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液(含双抗)，37℃含5%CO2孵箱培养，对数生长期细胞为实验对象。
1.2.2 分组 按照处理因素分为四组：实验组(加入TSP-1蛋白40 μg/ml)、空白对照组、CD36阻断组、CD47阻断组。阻断组细胞接种后先加入对应的单抗5 μg/ml，在5%CO2,37℃温箱孵育30 min,使单抗与细胞充分结合后再加入TSP-1。
1.2.3 MTT检测细胞生长 各组细胞以2×104/ml的浓度接种96孔板，每孔100 μl，孵育72 h后，吸去上清液，加入5 g/L的MTT继续培养4 h，吸去上清液，加入150 ml的DMSO震荡10 min至蓝紫色结晶完全溶解，酶标仪检测570 nm 各孔光吸收值，每组设6个复孔，计算抑制率，公式为(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值。
, 百拇医药
1.2.4 流式细胞术检测细胞周期 收获各组细胞后，70%冷乙醇固定，1 mg/ml RNase A 10 μl于37℃水浴30 min，100 μg/ml碘化丙锭(PI)50 μl,4℃避光20 min,调整细胞浓度为1×106/ml上机检测，CellQuest软件分析细胞周期。并计算增殖指数(PI)，公式为：PI=[(S+G2M)÷(G0/1+S+G2M)]×100%。
1.3 统计学方法 采用SPSS11.5行统计处理，资料用(x±s)表示，多组之间的比较采用单因素方差分析，α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 MTT法检测TSP-1对HCCLM3生长的作用结果 TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长显著低于对照组，与对照组相比抑制率分别为：23.63%、9.57%、18.13%，各组之间两两比较也有显著性差异，但CD36阻断后缓解TSP-1抑制作用的效果高于CD47阻断组。, 百拇医药(薛建锋 范正军 赵守魁 王艳瑛 郭广成 刘怀然)
, http://www.100md.com 【关键词】胆囊癌;凝血酶敏感蛋白-1；细胞周期，生长，增殖
The influence of TSP-1 on growth of gallbladder carcinoma cell
XUE Jian-feng,FAN Zheng-jun,ZHAO Shou-kui,et al.Department of Surgery,First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China
【Abstract】 Objective To explored the role and the mechanism of TSP-1 on the growth and cell cycle of of gallbladder carcinoma cellline GBC-SD.Methods The cell line was divided into 4 groups：control group,TSP-1 group,CD36-blocked group,CD47-blocked group.To detect the role of TSP-1,CD36,CD47 on cell growth by MTT test,on cell cycle by Flow cytometry.Results The growth of GBC-SD in other group were significantly slower than in control group,inhibitory rate was respectively 23.63%，9.57%，18.13%.Inhibitory effect of growth in CD36-blocked group was lower than in CD47-blocked group.Flow cytometry indicated that the cell number in G0/G1 phase in TSP-1 group increased than that in control group and CD36-blocked group,the cell number in S and G2/M phase in TSP-1 group reduced than in control group.The proliferation index was respectively：(39.55±2.12)(control group)、(26.21±0.61)(TSP-1 group)、(36.43±1.28)(CD36-blocked group)、(30.73±0.38)(CD47-blocked group)，the difference among groups were significantly.Conclusion TSP-1 can inhibit the growth of HCCLM3 cell through combining with the receptor CD36.
, 百拇医药
【Key words】Gallbladder carcinoma；Thrombospondin-1,cell cycle；Growth;Proliferation
胆囊癌的发病率近年来有增加的趋势，发现时已多属中晚期，手术切除率低，生长快，恶性程度高[1]，胆囊癌的生长增殖是在体内各种生长因子下共同作用的结果。凝血酶敏感蛋白-1(Thrombospondin-1，TSP-1)是一多功能糖蛋白，对调节肿瘤细胞的生长、粘附、迁移等生物学行为发挥重要作用 [2]。但是TSP-1对胆囊癌的作用尚未见报道，因此研究TSP-1对胆囊癌的生长增殖影响和可能的作用机制具有重要作用。
1 材料与方法
1.1 材料 胆囊癌细胞系GBC-SD购自于中科院上海细胞所；TSP-1蛋白、CD47单抗、CD36单抗、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自于Sigma公司。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 胆囊癌细胞系GBC-SD在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液(含双抗)，37℃含5%CO2孵箱培养，对数生长期细胞为实验对象。
1.2.2 分组 按照处理因素分为四组：实验组(加入TSP-1蛋白40 μg/ml)、空白对照组、CD36阻断组、CD47阻断组。阻断组细胞接种后先加入对应的单抗5 μg/ml，在5%CO2,37℃温箱孵育30 min,使单抗与细胞充分结合后再加入TSP-1。
1.2.3 MTT检测细胞生长 各组细胞以2×104/ml的浓度接种96孔板，每孔100 μl，孵育72 h后，吸去上清液，加入5 g/L的MTT继续培养4 h，吸去上清液，加入150 ml的DMSO震荡10 min至蓝紫色结晶完全溶解，酶标仪检测570 nm 各孔光吸收值，每组设6个复孔，计算抑制率，公式为(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值。
, 百拇医药
1.2.4 流式细胞术检测细胞周期 收获各组细胞后，70%冷乙醇固定，1 mg/ml RNase A 10 μl于37℃水浴30 min，100 μg/ml碘化丙锭(PI)50 μl,4℃避光20 min,调整细胞浓度为1×106/ml上机检测，CellQuest软件分析细胞周期。并计算增殖指数(PI)，公式为：PI=[(S+G2M)÷(G0/1+S+G2M)]×100%。
1.3 统计学方法 采用SPSS11.5行统计处理，资料用(x±s)表示，多组之间的比较采用单因素方差分析，α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 MTT法检测TSP-1对HCCLM3生长的作用结果 TSP-1组、CD36阻断组、CD47阻断组细胞生长显著低于对照组，与对照组相比抑制率分别为：23.63%、9.57%、18.13%，各组之间两两比较也有显著性差异，但CD36阻断后缓解TSP-1抑制作用的效果高于CD47阻断组。, 百拇医药(薛建锋 范正军 赵守魁 王艳瑛 郭广成 刘怀然)