丹参酮对实验性心肌肥厚大鼠凋亡相关因子表达的影响(1)
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【摘要】 目的 探讨丹参酮对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响。方法 采用皮下注射异丙肾上腺素造成心肌肥厚大鼠模型，通过免疫组织化学方法观察丹参酮对肥大心肌细胞凋亡相关因子Fas、Bcl2表达的影响。结果 异丙肾上腺素组大鼠心肌肥厚，Fas、Bcl2基因表达增加(P<0.05)，加入丹参酮干预后，Fas基因表达减弱(P<0.05)，Bcl2基因表达增加(P<0.05)。结论 丹参酮具有保护心肌，预防心肌肥厚的作用，其机制可能与抑制Fas基因表达，增加Bcl2基因表达有关。【关键词】丹参酮；心肌肥厚；细胞凋亡相关基因
Effects of tanshinone on apoptosis related gene expression in experimental cardiac hypertrophy in rats
YANG Chun-guang,SUN Chang-bin,QU Peng,et al.Medical College of Dalian University,Dalian 116622,China
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To study the effects and mechanisms of tanshinone on isoproterenol induced cardiac hypertrophy in rats.Methods Cardiac hypertrophy rat model was induced by subcutaneous injection of isoprenaline.The myocardial expression of apoptosis related genes,Fas and Bcl2 were detected by immuno-histochemical technique in cardiac hypertrophy rats treated by tanshinone.Results The expression of apoptosis related genes,Fas and Bcl2 were increased in cardiac hypertrophy rats induced by isoprenaline(P<0.05),but the expression of Fas was decreased(P<0.05)and Bcl2 was increased in rats treated by tanshinone(P<0.05).Conclusion Tanshinone may protect myocardium against hypertrophy.The suppression of myocardial hypertrophy might be associated with the decrease of Fas and increased of Bcl2 expression caused by tanshinone.
, 百拇医药
【Key words】Tanshinone;Cardiac hypertrophy;Apoptosis related gene
心力衰竭发生发展的一个重要病理过程就是心肌肥厚，心肌肥厚是由一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能的变化，其中就包括心肌细胞凋亡的过程[1]。丹参的脂溶性成分丹参酮，常被用于冠心病的治疗。近年对丹参酮的研究发现，它可以显著的逆转自发性高血压大鼠和异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)诱导的心肌细胞肥大[2]。但其分子学机制尚未完全清楚。本实验利用免疫组化技术观察丹参酮对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响，探讨丹参酮预防及逆转心肌肥大的作用机制。
1 材料
1.1 动物 SD雄性大鼠20只，平均体质量(200±50)g。由大连大学实验动物中心提供。
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1.2 试剂与仪器 丹参酮，上海第一生物制药厂生产(批号:071106)；盐酸异丙肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司(批号:071012)；兔抗多克隆抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。切片机(KD1508.浙江金华料迪仪器设备有限公司)；显微镜(CX21.日本OLYMPUS)；照相系统(80I.NIKON ECLIPSE)；Image Pro Plus 4.5图像分析系统(美国Media Cybernetics 公司)。
2 实验方法
2.1 动物分组和模型制备 大鼠随机分成NS对照组(sc等剂量NS)、Iso组(10 mg/kg)、丹参酮给药组(10 mg/kg，sc Iso后半小时腹腔注射)等3组，每组动物6只，连续给药3 d。第3天给药后4 h迅速摘取心脏，用生理盐水清洗,吸干后称取心脏湿重，然后切取左心室称重，计算左心重指数。左心重指数=左心室重量/心重(g/g)。
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2.2 心肌组织形态学观察(HE染色)左心室在10%甲醛中固定，逐级酒精脱水，二甲苯透明、浸蜡，石蜡包埋，常规切片4 μm，HE染色。观察组织切片的病理学改变。
2.3 免疫组化检测心肌组织中Fas、Bcl2表达 左心室心肌组织石蜡切片制备同上，常规脱蜡至水，3%H2 O2去离子水孵育，室温10 min 后，PBS洗涤；10%山羊血清封闭，室温孵育10 min；分别加1:50稀释的兔抗Bcl2、Fas多克隆抗体，37℃孵育3 h，PBS冲洗3 min×3次；加生物素标记二抗工作液，37℃孵育15 min，PBS 冲洗3 min×3次；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育15 min，PBS冲洗3 min×3次；DAB显色，自来水充分冲洗，脱水、透明、封片。
每组测定5张切片，每张切片取6个视野，以视野数为单位，每组共30个视野(n=30)，切片在显微镜400倍下用Image Pro Plus 4.5图象分析系统测量平均光密度值(average optical density，AOD)，然后计算均值作为此组的形态代表值，以细胞膜、细胞浆呈棕褐色为Bcl2和Fas蛋白阳性表达。
2.4 统计学方法 采用SPSS 10.0软件进行统计学分析各项数据，均数间比较用单因素方差分析。所有资料的各项数据均以均值±标准差(x±s)表示。
3 结果
3.1 左心重指数 Iso组心重指数明显增加，而丹参酮给药组与Iso组比较心重指数降低。见表1。
3.2 心肌组织形态学观察 光镜下对照组心肌纤维呈圆柱状，肌纤维膜，纵横纹，心肌纤维平行排列；Iso组心肌纤维排列相当紊乱，纤维出现断裂，无法看到横纹；丹参酮给药组心肌纤维排列整齐，横纹清晰，有分叉结构，细胞膜有轻度损伤。, http://www.100md.com(杨春光 孙长滨 曲 鹏 杨 权 李 佳)