子宫内膜息肉患者息肉组织中ER、PR、VEGF、MVD表达研究(1)
【摘要】 目的 探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、血管内皮生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)在子宫内膜息肉组织与正常子宫内膜中的表达及意义。方法 宫腔镜下观察并行子宫内膜息肉切除的患者40例，同时取同一患者非息肉部位内膜组织，石蜡包埋制成切片，HE染色按内膜的病理类型分为良性息肉增生组和增生期子宫内膜两组，符合条件的病例28例。用免疫组织化学方法测定ER、PR、VEGF、MVD含量，采用LeicaQ500IW图像分析仪进行测定，应用光密度值进行比较。结果 息肉增生组ER、PR、VEGF、MVD含量高于增生期子宫内膜。结论 患者子宫内膜息肉增生组和增生期子宫内膜的ER、PR、VEGF、MVD含量不同，VEGF在子宫内膜息肉的发生发展中占有重要地位。
【关键词】子宫内膜息肉；增生期子宫内膜；血管内皮生成因子；微血管密度
, 百拇医药
The stundy of expression of ER、PR、VEGF and MVD in endometrial polyps and prolifefrative phase endometrium for patients with abnormal uterine blooding
LI Jing-hua,WANG Xiao-guang,FENG Li-min,et al.Department of Obstetrics and Gynecology Tiantan Hospital,Beijing 100050,China
【Abstract】 Objective To evaluate the the expression of estrogen receptors(ER),progesterone receptors(PR)and vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)in patients withendometrial polyps.Methods 28 cases of endometrial polyps included in the biopsys were divided into 2 groups by HE staining pathologic result including endometrial polyps and proliferative phase endometrium.ER、PR、VEGF、MVD were measured in immunohistochemistry.ER、PR、VEGF index were determined with a computerized image analyzer.Results Expression of ER、PR、VEGF、MVD in the group of endometrial polyps is the higher than the group of proliferative phase endometrium.Conclusion The expression of ER、PR、VEGF、MVD in glandular epithelium were significant difference in two groups(P<0.01).ER,VEGF paly main function in endometrial polyps of patients with endometrial polyps.
, http://www.100md.com
【Key words】Endometrial polyps;Proliferative phase endometrium;VEGF；MVD
子宫内膜息肉常常引起不规则阴道出血，前者是子宫内膜受雌激素持续作用发生局灶性增生的良性病变，若同时应用孕激素这种改变仍然不能逆转[1]；VEGF主要生理功能是促进内皮细胞分化、增生、迁移、浸润调控血管发生和维持血管内皮细胞的功能，在组织正常增生和异常增殖的发生和发展过程中起着非常重要的作用。为此，测定了上述几种因子在子宫内膜息肉及正常子宫内膜组织中的表达，探讨与子宫内膜息肉发生的关系。
1 材料与方法
1.1 标本选择 宫腔镜下观察并切除子宫内膜息肉患者40例，同时取同一患者非息肉部位内膜组织，HE染色病理切片显微镜下筛选出子宫内膜息肉样增生及增生期子宫内膜28例。
, http://www.100md.com
所选患者符合以下标准:有异常子宫出血；半年内未服用任何激素类药物；所取标本大部分为月经中、后期子宫内膜。采取以上标本时，均经过患者同意。
1.2 标本制作 标本用10%福尔马林液固定，石蜡包埋后，连续切片，厚度为5 μm。切片经二甲苯脱腊、梯度酒精水化后，进行HE染色和免疫组织化学染色。
1.3 ER、PR、VEGF、Ⅷ因子相关抗原的检测
1.3.1 主要试剂和仪器 鼠抗人ER及PR单克隆抗体，鼠抗人VEGF单克隆抗体，0.01 mol/L PBS缓冲液，通用型链霉卵白素-辣根过氧化酶免疫组化染色试剂盒即SP试剂盒及DAB显色剂，以上试剂均购自北京中杉生物制剂公司。普通光学显微镜(日本OLYMPUS)；LeicaQ500IW图像分析系统。
1.3.2 主要试验步骤 石蜡切片60℃烤1.5 h，二甲苯中脱腊后，依次经100%、95%、90%、80%、70%降梯度酒精水化。水洗后用3%甲醇-H2 O2浸泡30 min，PBS(pH7.2~7.4)冲洗3次，每次3 min。抗原热修复，20 min，室温冷却25 min。PBS冲洗2 min×3次；滴加正常羊血清封闭液，湿盒中室温30 min；弃去血清后，直接滴加一抗(鼠抗人ER及PR单克隆抗体，均为1∶100；鼠抗人VEGF单克隆抗体，1∶100；兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体，1∶100)，以PBS代替一抗作为阴性对照，4℃，过夜；次日取出室温平衡，PBS冲洗3 min×3次；滴加SP试剂盒中的二抗，室温下孵育30 min；PBS冲洗3 min×3次；滴加SP试剂盒中的三抗，室温，30 min；PBS冲洗 3 min×3次；DAB溶液染色，显色时间长短根据镜下观察的显色效果确定，ER为100 s，PR为110 s，VEGF为7 min，MVD为5 min。自来水冲洗，蒸馏水洗，Mayer苏木精复染，经梯度酒精脱水、二甲苯透明后，用加拿大树胶封片。
1.3.3 Ⅷ因子相关抗原计数方法 Ⅷ因子相关抗原在血管内皮细胞胞浆中表达，为棕褐色颗粒，凡在内膜组织中与临近微血管、腺体组织分界清楚的任何一个染成棕色的细胞或细胞丛均被认为是一个新生血管，管腔大或管腔内有8个以上红细胞的血管不计其内。每一张片子先在低倍镜下(×100)浏览全片，取密度大点换高倍镜(×400)计数，取6个的不同视野范围，计数子宫内膜微血管的数目，计算其均值为微血管密度(MVD)。, 百拇医药(李晶华 王晓光 冯力民 张 华)
【关键词】子宫内膜息肉；增生期子宫内膜；血管内皮生成因子；微血管密度
, 百拇医药
The stundy of expression of ER、PR、VEGF and MVD in endometrial polyps and prolifefrative phase endometrium for patients with abnormal uterine blooding
LI Jing-hua,WANG Xiao-guang,FENG Li-min,et al.Department of Obstetrics and Gynecology Tiantan Hospital,Beijing 100050,China
【Abstract】 Objective To evaluate the the expression of estrogen receptors(ER),progesterone receptors(PR)and vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)in patients withendometrial polyps.Methods 28 cases of endometrial polyps included in the biopsys were divided into 2 groups by HE staining pathologic result including endometrial polyps and proliferative phase endometrium.ER、PR、VEGF、MVD were measured in immunohistochemistry.ER、PR、VEGF index were determined with a computerized image analyzer.Results Expression of ER、PR、VEGF、MVD in the group of endometrial polyps is the higher than the group of proliferative phase endometrium.Conclusion The expression of ER、PR、VEGF、MVD in glandular epithelium were significant difference in two groups(P<0.01).ER,VEGF paly main function in endometrial polyps of patients with endometrial polyps.
, http://www.100md.com
【Key words】Endometrial polyps;Proliferative phase endometrium;VEGF；MVD
子宫内膜息肉常常引起不规则阴道出血，前者是子宫内膜受雌激素持续作用发生局灶性增生的良性病变，若同时应用孕激素这种改变仍然不能逆转[1]；VEGF主要生理功能是促进内皮细胞分化、增生、迁移、浸润调控血管发生和维持血管内皮细胞的功能，在组织正常增生和异常增殖的发生和发展过程中起着非常重要的作用。为此，测定了上述几种因子在子宫内膜息肉及正常子宫内膜组织中的表达，探讨与子宫内膜息肉发生的关系。
1 材料与方法
1.1 标本选择 宫腔镜下观察并切除子宫内膜息肉患者40例，同时取同一患者非息肉部位内膜组织，HE染色病理切片显微镜下筛选出子宫内膜息肉样增生及增生期子宫内膜28例。
, http://www.100md.com
所选患者符合以下标准:有异常子宫出血；半年内未服用任何激素类药物；所取标本大部分为月经中、后期子宫内膜。采取以上标本时，均经过患者同意。
1.2 标本制作 标本用10%福尔马林液固定，石蜡包埋后，连续切片，厚度为5 μm。切片经二甲苯脱腊、梯度酒精水化后，进行HE染色和免疫组织化学染色。
1.3 ER、PR、VEGF、Ⅷ因子相关抗原的检测
1.3.1 主要试剂和仪器 鼠抗人ER及PR单克隆抗体，鼠抗人VEGF单克隆抗体，0.01 mol/L PBS缓冲液，通用型链霉卵白素-辣根过氧化酶免疫组化染色试剂盒即SP试剂盒及DAB显色剂，以上试剂均购自北京中杉生物制剂公司。普通光学显微镜(日本OLYMPUS)；LeicaQ500IW图像分析系统。
1.3.2 主要试验步骤 石蜡切片60℃烤1.5 h，二甲苯中脱腊后，依次经100%、95%、90%、80%、70%降梯度酒精水化。水洗后用3%甲醇-H2 O2浸泡30 min，PBS(pH7.2~7.4)冲洗3次，每次3 min。抗原热修复，20 min，室温冷却25 min。PBS冲洗2 min×3次；滴加正常羊血清封闭液，湿盒中室温30 min；弃去血清后，直接滴加一抗(鼠抗人ER及PR单克隆抗体，均为1∶100；鼠抗人VEGF单克隆抗体，1∶100；兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体，1∶100)，以PBS代替一抗作为阴性对照，4℃，过夜；次日取出室温平衡，PBS冲洗3 min×3次；滴加SP试剂盒中的二抗，室温下孵育30 min；PBS冲洗3 min×3次；滴加SP试剂盒中的三抗，室温，30 min；PBS冲洗 3 min×3次；DAB溶液染色，显色时间长短根据镜下观察的显色效果确定，ER为100 s，PR为110 s，VEGF为7 min，MVD为5 min。自来水冲洗，蒸馏水洗，Mayer苏木精复染，经梯度酒精脱水、二甲苯透明后，用加拿大树胶封片。
1.3.3 Ⅷ因子相关抗原计数方法 Ⅷ因子相关抗原在血管内皮细胞胞浆中表达，为棕褐色颗粒，凡在内膜组织中与临近微血管、腺体组织分界清楚的任何一个染成棕色的细胞或细胞丛均被认为是一个新生血管，管腔大或管腔内有8个以上红细胞的血管不计其内。每一张片子先在低倍镜下(×100)浏览全片，取密度大点换高倍镜(×400)计数，取6个的不同视野范围，计数子宫内膜微血管的数目，计算其均值为微血管密度(MVD)。, 百拇医药(李晶华 王晓光 冯力民 张 华)