4 h后将已分组给药的培养板移入37℃恒温密闭容器中，连续充以95%NO₂+5%CO₂混合气体，流速为20 ml/min，持续1 h。

    1.2.5 海马神经元细胞凋亡率的检测

    将上述处理过的细胞制成单细胞悬液，1000转/min离心10 min，摒上清，PBS冲洗，70%乙醇固定，400目的筛网过滤，加PI染液，上流式细胞仪检测。

    1.2.6 海马神经元上清液中SOD、MDA、NO的测定

    按试剂盒说明书的要求先求出样本的最佳加样量；海马神经元经上述同样处理后，取细胞上清液，按试剂盒说明书的要求操作，测定各样本的吸光度，并依下列公式计算出SOD，MDA，NO的含量。

    SOD 活力(U /ml)=(对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度÷50%×反映体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数。

    MDA 含量(nmol /ml)=(测试管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10 nmol /ml)×样本测试前稀释倍数。

    NO含量(umol /L)=(测试管吸光度-空白管吸光度)/(标准管吸光度-空白管吸光度)×标准品浓度(100 umol /L)×样本测试前稀释倍数 ......