重组Canstatin蛋白联合氟尿嘧啶治疗裸鼠结肠癌移植瘤的实验研究(2)
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1 材料和方法
1.1 试验动物、细胞株、药品及试剂 SPF级BALB/c裸鼠30只,4周龄,体质量16~18 g,购自中国药品生物制品检定所(合格证：京质字0052997)。SW-480结肠癌细胞系购于美国ATCC公司,南京凯基公司提供,单层贴壁生长,集落形成率为40%,裸鼠致瘤性为100%。5-FU购自江苏南通精华制药有限公司,CD31抗体购自北京中杉金桥生物公司。
1.2 动物模型的建立 将已培养好基本长满瓶壁的SW-480结肠癌细胞弃培养瓶内培养基，用平衡盐溶液(PBS)冲洗培养瓶2次，加入体积分数为0.25的胰蛋白酶数滴消化，将消化好的细胞吸入离心管内，600 转/min的离心机离心6 min，弃上清，加入不含小牛血清的RPMI-1640培养基3 ml，吸管吹打混匀(取适量计数细胞)再离心，弃上清，按每只裸鼠皮下接种细胞数2.5×1019/L，再加入无血清RPMI-1640培养基，供裸鼠皮下接种用。准备好的SW-480细胞悬液经台盼蓝染色活细胞数占0.95以上，按每只0.2 ml SW-480细胞悬液注射于消毒后的裸鼠皮下，观察肿瘤移植成功率。
1.3 试验分组 30只小鼠皮下移植处均成瘤，接种4 d后随机分成6组(每组5只)。①对照组(生理盐水0.3 ml/kg)；②Canstatin低剂量组(1 mg/kg ......
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