百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白表达的影响及意义(2)
1.2 生化指标检测 血清肌酐(creatinine,Cr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)采用BECKMAN CX-7全自动生化分析仪测定;24 h尿蛋白定量采用考马斯亮蓝法;尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)酶采用比色法。
1.3 肾脏组织病理 肾组织HE染色和Masson特染,光镜观察。在IDA-2000高清晰度数码显微图像分析系统下计算肾小管间质纤维化指数。高倍镜(×200)下随机选取10个不重叠视野测定小管间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比,进行半定量评分[2]。评分标准:0分:无病变; 1分:<25%;2分:26%~50%;3分:>50%。每张切片取10个视野的平均积分,再在各组取平均值。
1.4 免疫组化 采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(SABC)法检测肾组织中的TGF-β1和α-SMA,操作步骤按SABC试剂盒说明书进行。光镜下组织切片呈棕黄色颗粒性沉积区域为阳性染色部位。TGF-β1和α-SMA染色结果在高倍镜(×200)下随机选择20个不重叠的视野,采用半定量评分[3]。TGF-β1半定量评分标准:0分:无染色;1分:染色面积<25%;2分:染色面积25%~50%;3分:染色面积50%~75%;4分:染色面积75%~100% ......
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