高效液相色谱法测定人血中氢溴酸右美沙芬浓度
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【摘要】 目的 研究氢溴酸右美沙芬在健康志愿者体内的血药浓度。方法 采用高效液相色谱法测定8例健康受试者口服右美沙芬糖浆和片剂后不同时间血浆中的美沙芬浓度。结果 右美沙芬在5~500 ng/ml浓度范围内呈良好线性关系(r=0.9965)。结论 本法精密，准确，可用于氢溴酸右美沙芬的药动学研究。
【关键词】氢溴酸右美沙芬；血药浓度；高效液相色谱法
Content determination of dextromethorphan hydrobromide in human plasma by HPLC
LIANG Fa-Hua,HE Rui-xing.Renmin Hospital of Luoding,Guangdong Luoding 527200,China
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To study the concentration of dextromethorphan hydrobromide in human plasma.Methods An oral does of tablets and syrup were given to eight healthy volunteers in a randomized crossover design,respectively.the drug concentrations were determined by the HPLC.Results The dextromethorphan hydrobromide was a good linear,within a concentration range of 5~500 ng/ml,r=0.9965.Conclusion The method is accurate and precise，it is usable for the study of clinical dextromethorphan hydrobromide pharmacokinetics.
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【Key words】Dextromethorphan; Plasma concentration; HPLC
氢溴酸右美沙芬(dextromethorphan hydrobromide,DM)是一种中枢性镇咳药，其作用机制是通过阻断咳嗽中枢反射以提高中枢神经系统咳嗽阈值而起镇咳作用,其作用与磷酸可待因相当,但无可待因的镇痛和镇静作用,无成瘾性，治疗剂量不会抑制呼吸中枢和呼吸道黏膜分泌,临床应用镇咳效果显著,不良反应发生率低,临床应用极为安全，具有服用剂量少而镇咳效果好的优点，临床上广泛应用[1]。本实验通过采用HPLC法测定DM在8例正常人体内的血药浓度，进而对DM糖浆和片剂的生物利用度作出评价。现报告如下。
1 仪器与试药
日本Waters高效液相色谱仪，Ubondpak phenyl色谱柱，电子分析天平，旋涡混合器，电动振荡器，离心机等；
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乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；DM标准品，瑞士罗氏药厂生产；DM糖浆，广东罗定制药有限公司生产；每10 ml含DM 15 mg，DM片剂，广州光华药业有限公司生产，每1片含DM 15 mg。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 Ubondpak phenyl色谱柱，流动相：10 mm磷酸氢二钾缓冲液∶乙腈(55∶45，pH 4.0)；检测波长：220 nm；流速1.0 ml/min。
2.2 标准曲线制作与回收率测定 准确称取氢溴酸右美沙芬标准品25 mg，置25 ml量瓶中，加蒸馏水使溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为1 mg/ml的标准品溶液，再将其稀释成1 μg/ml，分别吸取5、10、25、50、75、100、200、300、400、500 μl，加入1 ml人新鲜空白血浆中，混匀，配成浓度为5~500 ng/ml的右美沙芬标准血浆溶液。
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准确称取地平泮标准品25 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解后加水稀释至刻度，配成浓度为1 mg/ml的安定标准品溶液，同样将其稀释成1 μg/ml，作为内标液。上述各浓度氢溴酸右美沙芬标准血浆溶液均加入100 μl内标液，混匀，然后加入正己烷∶正丁醇(10∶1)混合溶剂6 ml和0.1N NaOH溶液0.5 ml,水平振荡20 min后,离心10 min,将上层有机溶液吸入试管中,加入0.1N HCL溶液200 μl,水平振荡20 min后,离心15 min,下层酸液100 μl用于HPLC进样分析,吸取20 μl，按上述色谱条件分析，根据测得的美沙芬和内标色谱峰高算出峰高比。以美沙芬浓度为横坐标，峰高比为纵坐标，绘制标准曲线,得回归方程：Y=0.0128X+0.0276，r=0.9965。
吸取上述各浓度经提取处理后氢溴酸右美沙芬标准血浆溶液和氢溴酸右美沙芬标准水溶液同时进样分析进行比较,求得美沙芬在血浆中的提取回收率为92.6%(n=15)。
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2.3 方法重现性 选择10、50、100、300 ng/ml四个浓度的氢溴酸右美沙芬标准血浆溶液,在同1天内和不同天间经提取处理后进样分析,分别求出峰高比的日内变异系数和日间变异系数。四个水平的日内变异系数为1.2%~7.3%,日间变异系数为1.9%~8.3%。
2.4 实验设计与血样采集 选择8例无胃肠道疾病，肝肾功能检查均正常，实验前2周未服用任何药物的健康受试者，随机分为两组，按交叉设计进行两次实验，两次实验间隔1周。实验当天两组受试者于早晨空腹进行静脉插管并采血3 ml作为空白对照，然后分别单剂量口服两种美沙芬60 mg，糖浆40 ml，片剂4片，用200 ml开水送服。服药后分别于0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、8、12 h采血3 ml，在2500转/min离心15 min，分离出血浆，置-25℃冰箱中冷冻保存至测定。服药后4 h各受试者统一进食，实验期间忌烟酒，亦未服用任何其他药物。
2.5 美沙芬血药浓度测定 用HPLC按内标法进行定量测定，吸取各时间点血浆样本1 ml，按标准曲线制作项下所述进行提取处理后进样分析，将测得的美沙芬峰高比代入标准曲线方程，求出血浆样本中的美沙芬浓度。
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2.6 实验结果 8例健康受试者口服DM糖浆或片剂后，其血药浓度详细数据见表1和表2，平均血药浓度时间曲线见图1。
3 讨论
3.1 本实验采用高效液相色谱法测定氢溴酸右美沙芬的血药浓度，灵敏度高，准确性好。
3.2 从氢溴酸右美沙芬的血药浓度曲线图可以知道，美沙芬糖浆的人体药代动力学特性与片剂相似，但达峰血药浓度比片剂高，其生物利用度高于片剂。
3.3 美沙芬的人体血药浓度较低，为满足检测灵敏度要求，且美沙芬的安全性较好，本实验中试验剂量为60 mg，比临床单次常用剂量(15~30 mg)为高，但不超过临床1 d的最大用药量120 mg，试验中未见有不良反应发生。
参考文献
[1] 谭世杰.治疗学的药理学基础.人民卫生出版社,1987., 百拇医药(梁发华 何瑞兴)