抗HBV G145R HBsAg多克隆抗体的制备与鉴定(2)
2.2.2 中和实验 同上以G145R rHBsAg包被反应板,待测标本(抗G145R rHBs)稀释至适当浓度,先与等体积不同浓度抗原反应30 min,然后同上做间接ELISA,每一浓度中和抗原重复3孔,比色并计算各组反应孔OD均值。实验结果见表2。两种抗原均能获得阳性中和结果,其中rG145R HBsAg的中和能力显著强于r-wHBsAg。
2.3 Western blot鉴定 取G145R rHBsAg适量,经SDS-PAGE分离后,分别做考马斯亮兰R-250染色及其Western Blot分析,并以自然表达HBsAg及r-wHBsAg做对照。实验结果见图2。三者在SDS-PAGE染色强度相似,Western blot分析(待测抗体1/100稀释)结果显示三者的染色强度未见明显差别。
注:M:蛋白Marker;1~3:自然表达HBsAg、r-wHBsAg 及r-G145R HBsAg SDS-PAGE结果; 4~6:同法电泳分离, 抗G145R HBs(Poly) Western Blot分析之HBsAg、r-wHBsAg及rG145R-HBsAg结果
2.4细胞免疫组化染色以抗rG145R HBs(1/100稀释)为一抗 ......
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