骨髓穿刺组织石蜡制片方法改进的探讨
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【关键词】骨髓组织；脱钙液；改进方法
由于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬，不能直接进行石蜡制片，而经过脱钙处理后，才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色。脱钙过度或不当均可影响上述染色。因此，脱钙时间和脱钙液的选择十分重要。传统的方法用14%硝酸脱钙液脱钙常出现脱钙过度或不足，难以掌握，常造成组织切片不完整、组织结构破坏、细胞模糊不清，以致医生阅片时诊断困难甚至误疹。为此，近一年来，笔者用4%盐酸脱钙液，代替原有14%硝酸脱钙液，进行骨髓组织脱钙，取得到了比较好的效果，也避免了用塑料包埋切片后，不能进行免疫组化染色的不足。现将方法介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料 中山一院2007年全年骨髓活检标本480例。
1.2 方法 第1天：新鲜的骨髓标本立即置于10%甲醛液固定(过夜)。第2天：08：00上班，立即置于4%盐酸脱钙(3.5～4 h)：稍水洗。11：30置于70%乙醇30 min；12：00流水冲洗2.5 h，然后转入10%甲醛液补充固定。17：30分将骨髓标本与当天标本一起放入全封闭自动脱水机中脱水。第3天：石蜡包埋、切片、染色、出片交医生发报告。
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2 结果
与以往用14%硝酸脱钙相比，骨髓切片完整，细胞形态保存良好，染色鲜艳，核质对比清晰，并且免疫组化染色得到的效果较好。见图1~4。将骨髓组织，在固定充分的情况下进行14%硝酸与4%盐酸脱钙的比较，见表1。
3 讨论
过去，骨髓组织制片多采用甲基丙烯酸乙基(HEMA)等特殊包埋剂包埋，不需经脱钙处理可进行切片HE染色，但操作类烦琐也不能作免疫组化染色，因此， 笔者这样脱钙处理进行石蜡切片的技术方法，以满足临床病理诊断免疫组化辅助的需要。常规骨组织脱钙主要采用14%硝酸脱钙，但硝酸对骨髓组织破坏极大，免疫组化染色效果不佳。
实践证明，过去用的14%硝酸对骨髓组织脱钙，具有作用快，脱钙能力强的特点，但由于硝酸是强酸，往往对骨髓组织脱时间不易控制(以大头针能刺入骨髓组织无阻力感为标准来衡量脱钙时间)，常出现脱钙不足或脱钙过度等状况。脱钙时间过长，骨髓组织破坏，结构模糊不清或者无法制片；脱钙时间过短，脱钙不充分，骨髓组织较硬，以致无法制造出完整的切片。
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医院早上送来的骨髓组织，往往是刚刚穿刺的新鲜标本，固定时间还不够。需要进上步固定过夜，这样做与当天穿刺当天取材制片的比较，切片完整，厚薄均匀，细胞结构保存良好，免疫组化、特染染色效果较好。相反，固定时间不够的骨髓组织，无论在切片、HE染色、特殊染色和免疫组化中，染色效果都不理想。以致病理医生难以作出诊断，拖延了病理报告发出的时间，甚至造成误诊。
由于骨髓组织富含钙盐、纤维支架少，组织具有硬、脆、疏松的特点，4%盐酸脱钙液酸度比硝酸脱钙液酸度比硝酸脱钙液浓度较低，因此采取延长脱钙时间的做法，使脱钙过程缓慢而较持久地进行(脱钙时间一定不能少于4 h，以大头针能穿过无阻力为准，骨髓组织脱钙才算完成)。流水冲洗一定要充分，如果冲洗时间不够，骨髓组织带有酸性，HE染色时胞核着色偏浅，核质对比不清晰，免疫组化假阳性率高。因此流水冲洗时间不能少于2.5 h。
盐酸会使组织膨胀，而酒精对组织具有收缩作用。因此，脱钙后将组织放入70%乙醇作用30 min，以减低盐酸对组织影响。经过一段时间的反复比较和实践，用4%盐酸脱钙的方法能使骨组织切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色达到较稳定的效果，达到优质骨髓切片标准有助于诊断，得到到广大病理医生的认同。值得大力推广。
参考文献
[1] 胥维勇，杨群.脱钙方法与脱钙的选择及应用.中国组织化学与细胞化学杂志，2002，11(3)：263.
[2] 蔡秀玲，骆新兰，张威，等.骨髓穿刺活检标本石蜡切片的质控.诊断病理学杂志，2005，12(5)：392., http://www.100md.com(董 愉 董 毓 梁英杰 石慧娟 吴惠群)